HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况分析.docx

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HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况分析人乳头瘤病毒(HPV)属于球形DNA病毒，主要表现为尖锐湿疣、寻常疣[1]。随着肛门癌、宫颈癌及尖锐湿疣的发病率逐年递增，人乳头瘤病毒感染也得到人们的关注。据有关调查显示[2],HPV感染引起的生殖器疣占15%～20%。且我国每年新发现的宫颈癌约为13.15万，发病率及死亡率呈逐年递增趋势，同时发病年龄也趋于年轻化，严重危及女性患者的生命安全[3]。HPV的传染性较高，主要通过密切接触、间接接触、性传播、母婴传播以及医院性感染等途径传播[4]。由于女性阴道生态系统的独特性及动态性，由免疫、机体局部内分泌、阴道解剖结构及微生态菌群共同构成，一般情况下健康女性其阴道的微生态处于动态且平衡的状态，能有效保护机体具有抗感染的能力，可抵御病原体及医源性物质的黏附繁殖，一旦平衡打破就会增加患者感染HPV的概率[5]。研究发现[6,7,8,9]，原有阴道动态平衡会受连续的高危型人乳头瘤病毒感染影响，加速破坏进程，若患者发生多产、性紊乱等致癌因素，会促使细胞周期进一步失控，细胞凋亡受到抑制，防御及免疫功能受到破坏，引发宫颈癌。为此，本研究选取HR-HPV感染患者174例，分析HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况，为临床干预提供参考依据，现报道如下。1、资料与方法1.1资料来源回顾性分析2018年9月-2019年11月医院收治的174例HR-HPV感染患者临床资料，其中HR-HPV阳性感染患者87例为观察组，HR-HPV阴性感染患者87例为对照组。纳入标准:(1)已婚女性或存在性生活史的女性患者;(2)取样期间非月经期;(3)近期未服用雌孕激素及抗生素的患者;(4)患者知情并签署同意书。排除标准:(1)合并肝肾功能异常的患者;(2)存在免疫系统疾病的患者;(3)处于妊娠期;(4)既往有精神病史的患者;(5)不能主动配合本研究的患者。观察组患者年龄24～56岁，平均年龄为(39.96±5.22)岁;对照组患者年龄25～57岁，平均年龄为(40.94±5.23)岁。本研究已获得相关医院伦理委员会批准同意，两组患者一般资料相比，差异无统计学意义(P>0.05)。1.2方法阴道菌检测方法:(1)患者宫颈采用窥阴器暴露，使用无菌棉签于阴道侧壁内旋转5～10s后若棉签上存在分泌物则表明顺利取材;(2)对取材性状进行观察后将2滴10%氢氧化钾滴加在1根棉签上，对是否存在氨气味道进行检测，以利于阴道炎的初步判断;(3)选取生理盐水2ml，并将第2根棉签置于EP管中进行搅拌，用显微镜观察滴片里的滴虫;(4)将载玻片涂抹于第3根棉签，并进行革兰染色，乳酸杆菌、细菌性阴道炎及真菌形态可在油镜下观察，衣原体可用专用试剂盒检测。宫颈局部免疫功能检测方法:取患者脱落细胞及宫颈分泌物并放置在800ml的无菌试管中，CD4+T、CD8+T及CD4+/CD8+采用流式细胞术检测。免疫因子检测方法:分别抽取两组患者治疗前、后空腹静脉血8ml，经离心处理后分离血清，封口放置于-80℃冰箱待检;采用酶联免疫吸附法(生产厂家:深圳宏盛生物科技有限公司)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(NF-γ)、白细胞介素-2(IL-2)及白细胞介素-10(IL-10)的水平，操作步骤均严格按照说明书进行。1.3观察指标分析两组患者的阴道菌检测情况，记录两组患者的宫颈局部免疫功能指标水平变化，比较两组患者宫颈分泌物中的各项免疫因子表达情况。1.4统计学分析采用SPSS18.0软件进行统计学处理，计数资料以百分率表示，用χ2检验;计量资料以表示，用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。2、结果2.1两组患者阴道菌检测情况对比两组患者的滴虫及真菌检出情况相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的乳酸杆菌检出率18.39%明显低于对照组患者的56.32%，衣原体、细菌性阴道炎检出率17.24%、25.28%明显高于对照组患者的5.75%、10.34%，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。表1两组患者阴道菌检测情况[例(%)]2.2两组患者的宫颈局部免疫功能指标水平对比两组患者的CD8+T水平相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的CD4+T及CD4+/CD8+水平均明显低于对照组患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。表2两组患者的宫颈局部免疫功能指标水平2.3两组患者宫颈分泌物中的各项免疫因子表达情况对比两组患者的TNF-α及IL-10水平相比差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者的NF-γ、IL-2均明显低于对照组患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。表3两组患者宫颈分泌物中的各项免疫因子表达情况3、讨论宫颈癌是临床治疗中常见的恶性肿瘤类疾病，发病率高且呈逐年递增趋势[10]。近年来宫颈癌筛查受到了较高的重视，明显提高了早期宫颈癌的诊断率，而导致宫颈癌的危险因素是人乳头瘤病毒[11]。HPV感染生殖道的过程较为漫长，通过对尖锐湿疣的治疗后，若患者机体的免疫能力较强，经过1～2年病毒会自然消失。若患者的免疫功能较弱，则病毒可在细胞内潜伏若干年，一旦机体的免疫能力下降，潜伏的病毒即可恢复活动状态[12]。因此，为预防宫颈癌的发生，临床应加强对HPV感染患者早期干预及诊断的重视程度。有细菌学研究表明[13],HPV感染明显受阴道微生物环境的影响。阴道微生态结构是独特的、动态变化的，通常而言多种微生物菌群会存在于阴道内，并与阴道环境形成互相协调制约的动态平衡[14]。而HPV感染一般是在阴道动态平衡被打破的前提下发生的，也可引发癌变。机体的免疫功能在肿瘤初期并没有改变，但宫颈局部已经伴有一定程度的免疫抑制[15]。因此，分析HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况，为准确预测癌变，及早对患者进行治疗十分有利。健康女性的阴道菌由多种需氧菌及厌氧菌构成，阴道分泌物中最重要的是乳酸杆菌，其正常存在对维持阴道正常菌群起着关键的作用[16]。本研究结果显示，HR-HPV阳性感染患者的乳酸杆菌检出率18.39%明显低于HR-HPV阴性感染患者的56.32%,HR-HPV阳性感染患者的衣原体、细菌性阴道炎检出率依次为17.24%、25.28%，明显高于HR-HPV阴性感染患者的衣原体、细菌性阴道炎检出率5.75%、10.34%。分析其原因:阴道黏膜免疫系统可通过乳酸杆菌激活，使得局部免疫预防功能增强。对HR-HPV感染存在协同作用的是解脲及沙眼衣原体，宫颈局部PH可通过感染所致的炎性反应升高，阴道宫颈微环境的动态平衡被破坏，也使宫颈局部的免疫屏障受到损伤，进而使HR-HPV感染率增加[17,18,19]。林丽等[20]研究指出，HR-HPV感染所引发的宫颈癌及宫颈内瘤变与细菌性阴道疾病息息相关。在代谢过程中，因厌氧菌导致的细菌性阴道疾病会产生亚硝基胺，亚硝基胺在体内活化后能成为致癌物，且感染可升高宫颈分泌物里的A2磷脂酶浓度，使得HR-HPV易感性增加。因此，保持阴道菌群的平衡，降低有害菌入侵，促进HR-HPV阳性感染患者向阴性转变，患者的预后可得到有效改善。T淋巴细胞亚群能加强免疫应答，发挥细胞的免疫及免疫调节的功能，而机体正常免疫功能的维持受T淋巴细胞亚群的相互制约及协作的影响[21]。CD4+T细胞属于人体免疫系统中较为重要的免疫细胞，可辅助T细胞表达，对患者免疫功能的判断有着重要作用。CD8+T细胞通常在活化后分化为细胞毒性T细胞，对靶细胞能够特异性的杀伤。而T细胞免疫功能存在缺陷是由于CD4+T及CD8+T细胞比值的降低，两种细胞的平衡对监视肿瘤及调节免疫的意义重大[22,23]。本研究中，HR-HPV阳性感染患者的CD4+T及CD4+/CD8+水平均明显低于HR-HPV阴性感染患者，表明HR-HPV阳性感染患者宫颈局部免疫功能降低，宫颈病变情况更容易发生。TNF-α、NF-γ、IL-2及IL-10在HR-HPV感染患者的病情发展以及转归中发挥重要作用。TNF-α属于炎性反应的重要介质，可促使嗜酸性细胞释放炎症介质。NF-γ具有抗病毒、免疫调节及抗肿瘤特性。IL-2对机体的免疫应答和抗病毒感染等有重要作用，而IL-10能促进B细胞增殖、分化及抗体的产生[24,25]。研究结果显示，两组患者的TNF-α及IL-10水平相比差异无统计学意义(P>0.05)，但HR-HPV阳性感染患者的NF-γ、IL-2均明显较低，表明免疫细胞受各种微环境的抑制，降低了机体的免疫能力。综上所述，分析HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况，对相应病变的尽早发现、准确预测癌变以及对患者的早期治疗意义重大，值得临床推广使用。参考文献：[1]韩玉,艾桂娟,韩萍,等.阴道微生态与高危型人乳头瘤病毒感染和宫颈病变的相关性分析[J].中国计划生育和妇产科,2016,8(3):66-68.[3]张继红,腾国伟,斗智,等.九价人乳头瘤病毒疫苗接种后保护效果､免疫原性及安全性Meta分析[J].中国公共卫生,2019,52(4):491-496.[5]桂芳,黄娟,阳大庆,等.HPV感染对宫颈免疫微环境的影响[J].中国医药导报,201,9(13):467-472.[8]丁占平,童重新.石家庄市育龄妇女HPV感染情况调查分析[J].中国妇幼保健,2019,34(16):101-102.[10]陈思凯,史宏晖,冷金花.宫颈HPV感染与阴道内细菌微环境/免疫微环境的关系[J].生殖医学杂志,2019,17(6):209-210.[12]文政芳,杨君,赵淑珍,等.宫颈癌患者人乳头状瘤病毒感染与阴道菌群及炎性因子变化研究[J].中华医院感染学杂志,2016,26(19):4500-4502.[14]黄艳艳,沈琳,朱爱琴.宫颈高危型人乳头瘤病毒感染患者的阴道微生态分析[J].重庆医学,2019,7(5):33-34.叶建东,王科学,毛莉莉.HR-HPV感染患者阴道菌群检测及宫颈局部免疫状况分析[J].中国妇幼保健,2020,35(24):4726-4729.