晚期胃癌患者中淋巴细胞抗原6复合物E(LY6E)的表达与POF方案化疗疗效的关系研究胃癌是临床最常见的恶性肿瘤之一,由于胃癌早期无明显临床症状,且易发生远处转移的特性,大多数胃癌患者确诊时已是中晚期[1]。在既往研究报道中,晚期胃癌无进展生存期(PFS)以及中位生存期(OS)分别为6～7个月和9～13个月[2]。对于晚期胃癌,化疗是主要治疗手段,“紫杉醇脂质体+奥沙利铂+氟尿嘧啶”(POF)方案是目前临床常用的晚期胃癌的一线标准化疗方案之一[3],但因缺乏相关的有效的疗效预测指标,近年来其化疗疗效未有明显提高。因此,在目前肿瘤精准化、个体化治疗的大背景时代下,进一步研究胃癌的发生、发展机制,从而筛选出有效的相关预测因子,提高精准化、个体化治疗疗效,降低化疗的毒副反应,并在此基础上探索新的干预思路和化疗药物具有非常重要的意义。LY6E是淋巴基质细胞膜Ly6超家族的成员[4],也称为干细胞抗原2(SCA2)或胸腺共享抗原-1(TSA-1)。Ly6家族成员位于人类第8号染色体,8q24.3位点[5]。到目前为止,根据糖基磷脂酰肌醇(GPI)-固定信号序列,已有从11～36kDa的20种人的Ly6蛋白,鉴定并归类为跨膜或分泌[6]。大多数Ly6超家族的研究都集中在T细胞发育[7]和细胞黏附上的生理重要性[8]。在1986年和1993年分别通过对克隆小鼠LY6E和人类的LY6EcDNAs研究证实,LY6E在细胞黏附、通过T细胞受体的信号转导和T细胞发育等方面具有重要作用[9,10]。同时LY6E也证实与肿瘤的发生、肿瘤干细胞特性、肿瘤细胞的转移相关。LY6E作为HIF-1的激活物,在转录水平上调HIF-1α基因的表达,通过降低PTENmRNA表达水平以及激活PI3K/Akt通路,进而促进血管生成因子、VEGFA和PDGFB的表达。LY6E-HIF-1轴能增加肿瘤血管的密度,促进免疫缺陷小鼠肿瘤生长。既往在LvY等的研究中,分别采用qRT-PCR、Western-blot方法分别检测胃癌组织、正常组织,结果显示胃癌组织中LY6E表达明显高于正常组织(P<0.05),免疫组化结果也证实胃癌组织中LY6E阳性率高于正常组织(P<0.05)[11]。然而,LY6E与胃癌的临床治疗相关性研究未见报道,因此,本项研究通过检测晚期胃癌患者LY6E的表达,就其与临床病理相关性进行比较分析,并进一步评价其与POF方案临床疗效相关性,探讨LY6E与晚期胃癌临床病理特征的相关性以及其在治疗中的意义。1、资料与方法1.1临床资料选取我院2017年1月至2018年12月收治的晚期胃腺癌患者共45例。入组标准:①有明确病理学诊断;②Karnofsky评分≥60分;③有客观的可测量病灶,病灶大小可经影像学评估(CT或MRI);④未见其他原发或转移性肿瘤;⑤既往未接受过化疗;⑥所有患者入组前均签署化疗知情同意书。所有患者中,男性25例,女性20例;年龄≥60岁者36例,<60岁者9例,平均年龄68岁;Borrmann分型I型8例,II型12例,III型17例,IV型8例;未分化-低分化腺癌38例,中-高分化腺癌7例。所有患者均采用“紫杉醇脂质体+奥沙利铂+氟尿嘧啶”(POF)方案化疗,具体方案为紫杉醇脂质体(南京绿叶思科药业有限公司)135mg/m2,静脉滴注3h,第1天,使用前按照说明书要求进行预处理;奥沙利铂(江苏恒瑞医药股份有限公司)100mg/m2,静脉滴注2h,第2天;氟尿嘧啶(南通精华制药股份有限公司)500mg/m2,化疗泵持续静脉滴注,第1～5天,21天为1个周期。1.2疗效评价采用《实体瘤的疗效评价标准(RECIST)》:①完全缓解(CR):所有靶病灶消失,无新病灶出现,肿瘤标志物正常,至少维持4周;②部分缓解(PR):所有靶病灶最大径之和减少≥30%,至少维持4周;③稳定(SD):患者病灶缩小程度小于30%,靶病灶最大径之和缩小未达PR,或增大未达PD;④进展(PD):患者基线病灶长径总和增加或出现新病灶。客观缓解率(ORR):肿瘤缩小一定量并维持一定时间的患者比例,包含了CR+PR患者;疾病控制率(DCR):CR+PR+SD患者的比例。每2周期评价短期疗效,化疗完成6周期后评价总体疗效。临床受益评估:包括患者的疼痛评分、止痛药物消耗量、体力状况评分和体重变化,进行综合评价。其标准为疼痛评分减少≥50%、止痛药用量减少≥50%,体力状况KPS评分改善≥20分或体重增加≥7%,上述4项指标中任何1项改善,持续4周以上,评价为临床受益,任何1项恶化则认定为无受益。1.3免疫组化法检测LY6E的表达抗LY6E多克隆抗体试剂盒为NBP1-68553,NovusBiologicals,1mg/ml。将固定胃癌组织的石蜡块经4μm连续切片。石蜡切片在二甲苯中分离,在分级乙醇中再水化,在抗原提取液中煮沸,并在甲醇中加入3%的过氧化氢来抑制内源性过氧化物酶。然后,用抗LY6E多克隆抗体孵育,再经过DAB显色、苏木素复染以及封片,最后在显微镜下观察结果。结果判定由两名研究者在病理医师指导下独立阅片完成,若染色细胞≤10%记录为阴性,染色细胞>10%则为阳性。1.4统计学分析采用SPSS22.0软件进行统计学分析,计数资料以百分比表示,计数资料的组间比较采用卡方检验。以P<0.05判定为差异有统计学意义。2、结果2.1胃癌组织中LY6E的表达免疫组化结果显示,LY6E阳性表达为棕黄色染色,其在胃癌细胞中染色明显强于正常组织,并广泛分布于癌细胞的细胞膜及细胞质(图1)。图1胃癌组织和正常组织病理切片及免疫组化检测LY6E的表达2.2LY6E表达与患者临床病理特征的关系45例患者中,总体阳性率为71.1%(其中阳性32例,阴性13例)。未分化-低分化腺癌LY6E的阳性表达率显著高于中-高分化腺癌(78.9%vs28.6%),两者存在统计学差异(P<0.05);LY6E的表达与患者的性别、年龄、Borrmann分型的统计学差异不明显(P>0.05)(表1)。表1LY6E表达与患者临床病理特征的关系2.3LY6E表达与POF方案化疗近期疗效的关系45例患者均可评价疗效。总体ORR为31.1%,DCR为55.6%(其中CR2例,PR12例,SD11例,PD20例)。LY6E(+)患者的ORR和DCR均显著低于LY6E(-)患者,且两者差异具有统计学意义(P<0.05)(表2)。总体受益率为40.0%(其中临床受益者18例,未受益者27例)。LY6E(+)患者的临床受益率显著低于LY6E(-)患者(28.1%vs69.2%),其差异有统计学意义(P<0.05)。表2LY6E表达与POF方案化疗近期疗效的关系2.4LY6E表达与POF方案化疗毒副反应的关系本研究中,POF方案化疗相关的毒副反应主要为:骨髓抑制、口腔炎、胃肠道反应及肝功能损害,整体患者治疗耐受良好,其中Ⅲ-Ⅳ级的中性粒细胞下降、口腔炎、消化道反应以及Ⅱ级及以上肝功能异常等严重毒副反应较少,无严重不良反应引起的患者死亡。各种毒副反应发生率与LY6E表达相比较未有统计学差异(P>0.05)(表3)。表3LY6E表达与POF方案化疗所致毒副反应的关系3、讨论LY6E是淋巴基质细胞膜Ly6超家族的成员[4],国内外的研究及报道证实,其在人类中枢神经系统、乳腺、结直肠、子宫颈、卵巢、肺、头颈、胰脏、前列腺等肿瘤中均有高表达,且与肿瘤的发生、肿瘤干细胞特性、肿瘤细胞的转移相关[12]。但LY6E与晚期胃癌的相关性及其与化疗疗效的关系尚未有相关报道。本研究结果显示,LY6E的表达状态与晚期胃癌的分化程度相关,其在未分化-低分化腺癌中表达率显著高于中-高分化者;而与患者的性别、年龄、Borrmann分型均无关,该结果提示LY6E与胃癌的恶性程度相关,因此LY6E可能为晚期胃癌恶性程度的判断提供一个新的独立的指标,从而指导晚期胃癌的治疗。而LY6E与胃癌预后的相关性,可进一步通过随访患者PFS、OS等,研究其相关性。近几年的研究报道中,紫杉醇单药或以其为基础的联合化疗在NCCN胃癌的治疗指南中被推荐为进展期胃癌的一线治疗方案[13]。既往研究结果显示,通过紫杉醇单药治疗进展胃癌,其反应率、疾病缓解率、中位总生存期、中位无进展生存期分别为39.1%、69.6%、7.5个月、4.1个月,而在联合紫杉醇的POF方案中,分别为47.3%、89.2%、11.4个月、6.6个月[14]。2019年ASCO会议上,福建省肿瘤医院林榕波教授团队的研究证实,POF较传统FOLFOX方案生存率及ORR率均有提高(PFS:6.444个月vs4.007个月;OS:9.534个月vs6.641个月;ORR:56.7%vs36.6%)[15]。因此,在患者能耐受多药方案化疗的前提下,联合化疗为更优的选择。本研究中患者的总体ORR为31.1%,DCR为55.6%,低于既往报道,考虑本研究患者均为晚期胃癌且肿瘤分化程度低相关。进一步研究证实,与LY6E(-)患者相比,LY6E(+)患者的ORR和DCR均显著降低(ORR:18.8%vs61.5%;DCR:43.8%vs84.6%),且临床受益率也显著降低。本研究患者治疗耐受良好,无相关死亡病例,与LY6E表达比较未有统计学差异。上述结果显示,相对于LY6E(+)的晚期胃癌患者,LY6E(-)的患者预后更好,且更有可能从POF方案化疗中获益,因此我们可以采用通过检测LY6E的表达情况,来预测POF方案化疗的晚期胃癌患者的临床治疗疗效及获益率。综上所述,LY6E在晚期胃癌组织中存在高表达,其阳性表达与晚期胃癌的分化程度相关,且LY6E表达阴性的患者更能从POF化疗方案中获益。LY6E在胃癌发生发展、生物学行为中的具体作用机制以及对患者预后的影响尚不完全清楚,有待进一步研究。本实验为一项回顾性研究,纳入病例数较少,化疗方案相对单一,未来可通过多中心、前瞻性随机对照研究,进一步研究LY6E在胃癌中扮演的角色。总而言之,LY6E可作为一个潜在的新的生物治疗靶点,改善晚期胃癌治疗现状,为胃癌甚至其他肿瘤的治疗研究提供新的思路。参考文献：[1]罗会芹,何义富.晚期胃癌分子靶向治疗进展[J].临床肿瘤学杂志,2017,22(5):455-460.[3]卢玮冬,左云,许震,等.PCF和DCF治疗进展期胃癌的临床分析[J].中国血液流变学杂志,2017,27(2):177-179.[13]邱海波,周志伟.NCCN胃癌临床实践指南2017年第五版更新要点解读[J].中华胃肠外科杂志,2018,21(2):160-164.[14]林锦源,郭增清,王晓杰,等.含紫杉醇方案一线治疗379例进展期胃癌的临床观察[J].临床肿瘤学杂志,2013,18(7):624-627.王少开,左云,梁素莹,倪晨.淋巴细胞抗原6复合物E的表达与POF方案治疗晚期胃癌疗效的相关性分析[J].现代肿瘤医学,2020,28(17):3020-3023.基金:张家港市青年科技项目(编号:ZJGQNKJ201806)。
