液中干燥法制备龙胆总苷掩味微囊讨论.doc

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液中干燥法制备龙胆总苷掩味微囊讨论=“news_bd”>龙胆(Gentianachinensis)为龙胆科植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag、龙胆Gentian.ascabraBge.、三花龙胆GentianatrifloraPall.或滇龙胆GentianarigescensFranch.的干燥根和根茎。前三种习称龙胆，后一种习称坚龙胆。具有清热、泻肝、定惊之功效。据本草纲目记载，因其叶如龙葵、味苦如胆而得名。根据化学成分研究表明，龙胆总苷是龙胆、秦艽等龙胆科植物活性最强的有效成分之一。现代药理研究证明龙胆总苷对多种肝损伤具有显著的保护作用，还具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎镇痛的作用，具有非常重要的开发价值。龙胆总苷有较好的药理作用和药用价值，但是由于味极苦限制了其开发利用，本实验运用液中干燥法将龙胆总苷制备成微囊以掩盖其苦味，使服用者容易接受，同时也为龙胆总苷制剂的多样性奠定基础。

1仪器与试药UV-6100型紫外可见分光光度计(上海美谱达仪器有限公司)，SB-5200DT型超声仪(200W，40kHz，宁波新芝生物科技股份有限公司)，BP211DAG型电子天平(德国Satorius)，DFY-300型摇摆式高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司)，JB-5定时双向数显恒温磁力搅拌器(常州朗越仪器制造有限公司)。龙胆饮片购于四川新荷花中药饮片股份有限公司(批号：1111044，产地：云南)，粉碎至粗粉，备用。龙胆苦苷对照品购于成都曼思特生物科技有限公司(批号：MUST-14081205)，乙基纤维素(成都市科龙化工试剂厂)，液体石蜡(成都市科龙化工试剂厂)，司盘-80(成都市科龙化工试剂厂)，滑石粉(成都市科龙化工试剂厂)，其他试剂均为分析纯。

2方法和结果2.1微囊测定方法的建立2.1.1最大吸收波长的确定分别取不同浓度的龙胆苦苷对照品溶液在200～800nm作紫外扫描，确定龙胆苦苷的最大吸收波长为274nm。

2.1.2对照品溶液配制及标准曲线绘制精密称取0.00328g龙胆苦苷对照品于25mL棕色容量瓶中，先用10mL70%乙醇溶解，再加乙醇定容至刻度，摇匀，即得。精密吸取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5mL于容量瓶中，得龙胆苦苷浓度为6.56μg/mL、13.12μg/mL、19.60μg/mL、26.24μg/mL、32.80μg/mL、39.36μg/mL的溶液，以70%乙醇稀释至刻度，用紫外分光光度计在274nm处，以70%乙醇为随行空白，测定吸光度，所得结果以龙胆苦苷溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得回归方程为Y=0.0192X+0.0114(r=0.9991)，对照品浓度在13.12～39.36μg/mL范围内线性关系良好。

2.1.3载药量和包封率的测定精密称取微囊适量于容量瓶中，加入少量蒸馏水超声20min后，加水至刻度，摇匀。过滤，弃去初滤液，收集续滤液5mL，置50mL容量瓶内，稀释至刻度，摇匀。在274nm波长处测定吸光度。据标准曲线回归方程计算龙胆苦苷的含量。微囊载药量和包封率的计算公式如下：包封率=微囊中含药量/投药量×l00%;载药量=微囊含药量/微囊重量×l00%。

2.2龙胆总苷提取物的制备精密称取500g龙胆药材，用12倍量60%乙醇加热回流提取3次，第1次2h，后两次各1h，合并3次提取液，减压回收溶剂，浓缩后离心，加入适量纯化水，配成一定浓度的龙胆上柱液。上柱液浓度为0.2g/mL，上于HPD-100型大孔树脂上，用5BV浓度为30%乙醇进行洗脱，收集洗脱液，真空干燥，粉碎即得。

2.3龙胆总苷掩味微囊的制备2.3.1液中干燥法制备龙胆总苷微囊称取适量乙基纤维素于50mL烧杯中，加入25mL丙酮置于磁力搅拌器上搅拌至乙基纤维素完全溶解，取相应比例量的龙胆总苷提取物和滑石粉于乙基纤维素溶液中，磁力搅拌直至混匀。取适量液体石蜡，以一定的比例加入司盘-80，搅拌均匀，放入冰浴中，在搅拌下将乙基纤维素溶液缓慢倒入液体石蜡中。继续搅拌，保持冰浴2h，自然升温4h，使丙酮挥发完全。抽滤除去液体石蜡，用石油醚多次洗涤，减压干燥，即得粉末状乙基纤维素微囊。

2.3.2星点设计-响应面法优选微囊成型工艺根据前期单因素试验结果，运用星点设计-效应面法选择对微囊成型工艺影响较大的4个因素进行四因素五水平的实验设计，考察乙基纤维素(EC)与药物的比例、油水相比例(液体石蜡与丙酮的体积比)、表面活性剂(司盘-80)的用量、EC溶液的浓度等对微囊性质的影响，最终确定最佳制备工艺。数据处理采用归一化法，总评OD=(d1d2dn)1/n(n为指标数，采用Hassan求得单一指标的归一值，即di=(Yi-Ymin)/(Ymax-Ymin)，其中Yi为实测值，Ymax和Ymin分别为每一个指标在不同次试验中测得的最大值和最小值。

2.3.3模型的建立与回归分析以OD值为因变量(Y)，A，B，C，D为自变量，采用Design-Expert7.0.0软件进行多元线性回归和二项式拟合，模型通过复相关系数和方差分析进行判断。结果可知：多元线性回归方程P=0.2563，无统计学意义;二项式拟合回归方程：Y=0.14+0.040A+0.009622B+0.003924C-0.018D+0.013AB-0.014AC+0.09AD+0.017BC+0.046BD-0.03CD+0.019A2+9.073×10-4B2+0.021C2+0.013D2(r=0.9825)。二项式拟合方程相关系数大，说明二项式拟合方程拟合效果好，可信度高，可用于对龙胆总苷微囊的成型工艺进行分析和预测。

2.3.4微囊成型工艺的优化与预测根据已确定的方程为模型，以OD值为因变量，绘制三维曲面图(见图1)，结果最优工艺条件为：药物与乙基纤维素(EC)的比例为0.6∶1，油水相比例为3∶1，表面活性剂的用量为1.5%，EC溶液的浓度为2.0%，总评OD预测值为0.5486。

2.3.5验证试验按优选的工艺条件进行3次验证试验，结果OD值分别为0.5403、0.5389、0.5493，平均OD值为0.5428，RSD为1.04%，与预测值偏差0.91%，说明建立的数学模型可靠，预测性良好。

2.4龙胆总苷微囊的掩味评价本实验选用最常用的经典人群口感评价方法(TraditionalTraditionalHumanTastePanelMethod，THTPM)，简称口尝法。该方法是对掩味效果是否有效可行的最直接的方法。本实验招募20名健康志愿者作为口尝者，并对其详细讲解评价方法，保证所得实验结果客观准确。评价方法如下：苦味评价分为5个等级，分别为：0级—没有苦味;1级—微微能够感觉到苦味;2级—稍有苦味，但是可以接受;3级—有明显的苦味;4级—有强烈的苦味，让人难以接受。口尝方法如下：配20份药物溶液(溶液所含龙胆苦苷的含量为160mg)，请20名志愿者口尝，药物溶液在口腔内停留30s，及时记录苦度等级，漱口，统计。统计每个等级的人数。由实验结果可知，本研究所制备的龙胆总苷微囊能够起到掩盖药物苦味的目的。

3讨论中药制剂的不良口味普遍不被患者接受，限制了其发展应用。就目前为止，矫味方法很多，如：添加矫味剂，包衣技术，环糊精包合技术，微型包囊技术等。然而添加矫味剂对于极苦的药物得不到较好的掩味效果，液体药剂(如溶液剂、混悬剂、糖浆剂或醑剂等)不适合包衣，β-环糊精包合技术由于β-环糊精分子的结构决定了其对于亲水性较强的药物包封率低。微型包囊技术有多种制备方法，本文所选的药物水溶性较强，因而选用液中干燥法来制备。液中干燥法(亦称溶剂挥发法)。此方法是一种从乳状液中除去分散相的挥发性溶剂制备微囊的方法。具体又分为水中干燥法和油中干燥法两种，其本质区别在于外相保护液前者为水，后者为油性液体(多用液体石蜡和植物油)。本实验选用的龙胆总苷水溶性强，且目的是为了掩盖其苦味，因而选用的是油中干燥法。微囊制备过程中加入适量滑石粉增加了微囊的流动性和表面光滑性。微囊制备过程中，乙基纤维素应完全溶解于丙酮中，如果溶解不完全会影响微囊的产率和微囊的成型;所投入的药物细粉应尽量细，否则对微囊成型影响较大。