反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷的含量药学论文.doc

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反相高效液相色谱法测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷的含量_药学论文作者：刘伟娜，高洁，张雪，禇文静，黄喜茹，侯海妮【摘要】目的建立测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷含量的方法。方法采用RP-HPLC法，色谱柱为DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm,5μm)柱,以甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.1)为流动相，检测波长320nm,流速为1.0 ml·min-1。结果绿原酸在4.30～34.40μg·ml-1范围内线性关系良好,回归方程为：A=127.3C-4.396，r=0.999 9,平均回收率102.1%，RSD=0.94%;黄芩苷在15.52～108.64 g·ml-1范围内线性关系良好,回归方程为：A=38.15C+55.1，r=0.999 7,平均回收率100.8%，RSD=1.4%。结论该法灵敏、简便、准确,可用于鼻炎滴剂的质量控制。【关键词】鼻炎滴剂;绿原酸;黄芩苷;反相高效液相色谱Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of chlorogenic acid and baicalin in coryza dripping solution.MethodsRP-HPLC method was used.The column was DiamonsilTM C18(250 mm×4.6 mm,5μm),the mobile phase was methanol-water-phosphoric acid(52∶48∶0.1),the flow rate was 1.0 ml·min-1,the detection wavelength was 320 nm.ResultsThe linearity of chlorogenic acid was good in the range of 4.30～34.40μg·ml-1,regress equation was A=127.3C-4.396,r=0.9999,and average recovery rate was 102.1%,RSD=0.94%;the linearity of baicalin was good in the range of 15.52～108.64μg·ml-1,regress equation was A=38.15C+55.1，r=0.999 7,average recovery rate was 100.8%,RSD=1.4%.ConclusionThe method is sensitive,simple,accurate,and can be used for the quality control of coryza dripping solution.Key words：Coryza dripping solution;Chlorogenic acid;Baicalin;RP-HPLC鼻炎滴剂是中西复方溶液制剂(喷雾剂)，收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十八册，属中药保护品种，主要成分为金银花提取液、辛夷油、冰片、黄芩苷、盐酸麻黄碱等，具有散风、清热、通窍之功能，临床用于风热蕴肺型急、慢性鼻炎[1]。原标准中只用薄层法鉴别辛夷油，分光光度法测定黄芩苷。鼻炎滴剂的质量控制，有报道用盐酸麻黄碱作为质量控制指标，用GC法测定其含量[2];还有用薄层法鉴别鼻炎滴剂中的金银花和盐酸麻黄碱，HPLC法测定黄芩苷的质量控制方法[3]。用其中绿原酸和黄芩苷两种活性成分作为质量控制指标的方法目前未见报道。本文研究建立了同时测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷含量的反相高效液相色谱法，对控制鼻炎滴剂的质量具有一定意义。1仪器和试剂Agilent 1200全自动高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、自动控温进样器、紫外可变波长检测器)。Agilent化学工作站。JA1203A型电子天平(上海精密科学仪器有限公司);TCQ-250超声波清洗器(北京医疗设备二厂)。化学对照品:绿原酸(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110753-200212),黄芩苷(中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110715-200514)。供试品:鼻炎滴剂(市售规格：10ml/瓶,广东佛山德众药业有限公司生产：批号06001、07015、07062)。试剂：甲醇(进口色谱纯),磷酸(优质纯),重蒸水(自制)。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱:DiamonsilTM(钻石)C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相：甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.1);流速：1.0 ml·min-1;柱温：30℃;检测波长：320 nm;进样量：20μl。在上述色谱条件下，绿原酸和黄芩苷的色谱峰与相邻峰的分离度均大于2，理论塔板数以绿原酸计算大于3 000。经紫外检测器检测，供试品中绿原酸和黄芩苷的保留时间与对照品一致(见色谱图1)。A.对照品B.鼻炎滴剂C.阴性对照1.绿原酸2.黄芩苷图1对照品和鼻炎滴剂HPLC图2.2对照品溶液制备精密称取绿原酸对照品2.15 mg，黄芩苷对照品3.88 mg，分别置25 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度。绿原酸对照品溶液的浓度为每毫升含86.0μg，黄芩苷对照品溶液的浓度为每毫升含155.2μg。2.3供试品溶液的制备精密量取鼻炎滴剂1.0 ml置10 ml量瓶中,加50%甲醇稀释到刻度,摇匀,用0.45μm微孔滤膜过滤,取续滤液,即得供试品溶液。2.4标准曲线的制备精密量取绿原酸对照品溶液,加50%甲醇制成绿原酸浓度分别为4.30，8.60，12.90，17.20，21.50，25.80，30.10，34.40μg·ml-1的对照品溶液。精密量取黄芩苷对照品溶液,加50%甲醇制成黄芩苷浓度分别为15.52，31.04，46.56，62.08，93.12，108.64μg·ml-1的对照品溶液。按上述色谱条件,进样20μl,记录色谱峰面积。以峰面积A对浓度C(μg·ml-1)进行线性回归,求得回归方程为：绿原酸：A=127.3C-4.396 4，r=0.999 9;黄芩苷：A=38.15C+55.1，r=0.999 7。绿原酸的线性范围为4.30～34.40μg·ml-1;黄芩苷的线性范围为15.52～108.64μg·ml-1。2.5精密度实验按上述色谱条件,取线性关系项下对照品溶液,取20μl进样,连续进样5次，绿原酸峰面积的RSD为0.07%，黄芩苷峰面积的RSD为0.13%，结果表明精密度良好。2.6阴性对照实验按处方和工艺自配不含金银花和黄芩苷的阴性制剂，再按供试品制备方法制备溶液并测定，结果阴性溶液在绿原酸和黄芩苷对照品相同保留时间处未出现色谱峰，故认为无干扰。2.7稳定性和重现性实验取同一供试液，每2 h进样20μl，结果在12 h内绿原酸峰面积的RSD为0.52%;黄芩苷峰面积的RSD为0.37%。表明样品至少在12 h内稳定。取同一批号(06001)的鼻炎滴剂，按供试品溶液制备方法制备5份供试品溶液，各进样20μl，测得绿原酸的平均含量为0.265 8 mg·ml-1(RSD=0.61%);黄芩苷的平均含量为21.41 mg·ml-1(RSD=0.55%)。2.8加样回收率实验绿原酸回收率的测定：精密吸取已知含量的样品(2007015)0.84 ml，置10 ml量瓶中，平行7份，分别加入绿原酸对照品溶液0.80，0.84，0.88，0.92，0.96，1.0，1.04 ml，用50%甲醇稀释至刻度,摇匀。按样品的测定方法测定，按标准加入法计算回收率。黄芩苷回收率的测定：精密吸取已知含量的样品(2007015)0.1 ml置100 ml量瓶中，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀(浓度为20.87μg·ml-1)。再精密吸取此液3.0 ml至10 ml量瓶中，平行7份，分别加入黄芩苷对照品溶液0.86，0.90，0.94，0.98，1.02，1.06，1.10 ml，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀。按样品的测定方法测定，按标准加入法计算回收率。结果见表1。2.9样品的测定取一种浓度的被测组分的对照溶液20μl进样,取峰面积的平均值，与试样液在相同条件下进样所得峰面积用外标一点法计算含量。结果见表2。3讨论在色谱条件的考察中，为使鼻炎滴剂中的绿原酸和黄芩苷与其它组分达完全分离，曾对流动相的组成和比例进行了探索，采用甲醇-水-冰醋酸(25∶75∶1)作流动相，黄芩苷在50 min内不出峰;用甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.3)作流动相，绿原酸和相邻杂峰分离度<1.5;增加流动相中甲醇的比例，绿原酸和相邻杂峰的分离度逐渐增大，当采用甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.1)作流动相时，绿原酸和黄芩苷的色谱峰与相邻峰的分离度均大于2,且峰形好,故选择甲醇-水-磷酸(52∶48∶0.1)作为流动相。表1方法的回收率表2鼻炎滴剂的测定结果经紫外检测，绿原酸的最大吸收波长为324 nm，黄芩苷的最大吸收波长为278 nm。鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷的含量相差悬殊，为提高含量低的绿原酸的检测灵敏度，我们曾选择绿原酸的最大吸收波长324 nm作为检测波长，但黄芩苷的峰形不好，经多次试验，选择接近绿原酸的最大吸收波长且黄芩苷又有一定吸收的320 nm作为检测波长。在回收率的测定中，我们曾在已知含量的样品中同时定量加入绿原酸和黄芩苷的标准溶液，按标准加入法同时测定两组份的回收率，但因制剂中黄芩苷的含量比绿原酸高得多，黄芩苷的加入量较小，故测定误差较大。两组份的回收率按标准加入法分别测定，得到了满意结果。本文建立的RP-HPLC法可以同时测定鼻炎滴剂中绿原酸和黄芩苷的含量，即可用这两种活性成分作为质量控制指标。与卫生部标准相比，既增加了质量控制指标成分，又克服了分光光度法影响因素多、测定误差大的缺点。此法专属性好，灵敏度高，操作简便，结果准确可靠，对鼻炎滴剂的质量控制有一定意义。【参考文献】[1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准，第十八册[S].中药成方制剂，1998：71.[2]刘贵中.鼻炎滴剂中盐酸麻黄碱的含量测定[J].中药材，1998，21(4)：205.[3]祝美华，沈丽霞，张新房.鼻炎滴剂质量分析方法的改进[J].食品与药品，2007，9(9)：25.