蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离和部分序列测定动物医学论文.doc

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蛋鸡J亚群禽白血病病毒的分离和部分序列测定_动物医学论文【中文摘要】J亚群禽白血病(Avian leucosis virus subgroup J,ALV-J)是一种病毒引起的禽类肿瘤性疾病，又称作骨髓细胞瘤病(Myelocytomatosis)。J亚群禽白血病自发现以来，仅见于肉鸡发病的报道，该病给世界上许多国家的养鸡业带来了巨大的经济损失。2002年中国农业大学徐镔蕊发现了蛋鸡J亚群禽白血病。自然发病的蛋鸡表现为贫血、消瘦、产蛋下降、死亡率达10％，尸体剖检可见卵巢、输卵管发育不良，给蛋鸡业造成很大的经济损失，经过病理学、免疫组化学以及PCR方法检测ALV-Jgp85抗原，并对该病毒亚群特异性的序列进行测定，在国内外首次发现并报道了蛋鸡J亚群禽白血病的自然病例。本研究采用临床发病蛋鸡的病料进行了病毒分离。病料(肝、脾、肾)过滤除菌后接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)。培养7天后，用ALV-Jgp85特异性单抗进行间接荧光抗体法(IFA)检测接种的CEF，结果发现CEF的胞浆内有明显的特异性荧光，细胞核未被染色，用免疫组化的方法检测到ALV-J囊膜特异性蛋白gp85的存在，为了进一步对病毒核酸序列进行分析，我们提取接种病料的CEF的总RNA，做反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)，在pol基因的3′端和gp85编码基冈的内部设计了一对引物，扩增得到长度为545bp的ALV-J特异性片段，与预期片段大小相符，经TaKaRa公司序列测定后，与ALV-J原型株HPRS-103的序列进行了比较，发现其核苷酸同源性为97.4％，所编码氨基酸的同源性为96.1％。本研究结果显示我们从蛋鸡中首次成功分离到J亚群禽白血病病毒，说明本实验所研究蛋鸡的骨髓细胞瘤病是由ALV-J引起。对蛋鸡ALV-J的分离，一方面为之前人们所认识的引起蛋鸡产蛋下降的疾病的病原增添了新的成员，同时也将为更好的防治和根除ALV-J、减少养鸡业的经济损失具有重要的理论和实际意义。