抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹模型宫颈上皮、神经节及大脑皮质的影响医学论文.doc

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抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹模型宫颈上皮、神经节及大脑皮质的影响_医学论文作者：陈信生，范瑞强，雷娓娓，国维【关键词】抗病毒胶囊摘要：【目的】探讨抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理。【方法】豚鼠24只，随机分为4组，分别为模型对照组、抗病毒1号组、抗病毒2号组及阿昔洛韦组，复制生殖器疱疹模型后4d分别给予相应的药物，模型组给予等容量生理盐水，连续9d给药后，取大脑组织、脊神经节、宫颈上皮进行透射电镜观察。【结果】在模型组的脊神经节中发现乙型单纯疱疹病毒(HSV2)颗粒，大脑皮质、宫颈上皮未见HSV2存在，各治疗组脊神经节病毒颗粒数量较模型组减少，细胞器的损伤程度减轻；与无病毒颗粒标本比较，有病毒颗粒标本各细胞器的损伤较重。【结论】抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹模型动物的病理改变有治疗作用，其机理可能是通过抑制HSV在体内的活动状态，并佐证了HSV2在脊神经节中潜伏的观点。关键词：疱疹，生殖器/中药疗法；宫颈疾病/中药疗法；抗病毒胶囊/治疗应用；清热祛湿剂/治疗应用；神经节，脊/超微结构；大脑皮质/超微结构；病病模型，动物；豚鼠中药抗病毒胶囊是我院院内制剂，用于治疗生殖器疱疹有效率达915%［１］。为了探讨其治疗生殖器疱疹的作用机理，我们进行了抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹模型宫颈上皮、脊神经节及大脑皮层影响的电镜观察，现报告如下。1材料与方法11药物抗病毒胶囊由广州中医药大学第二附属医院(即广东省中医院)制剂室提供，其中抗病毒1号胶囊的主要成份有板蓝根、虎杖、茵陈等，批号：20010122；抗病毒2号胶囊主要成份有黄柏、西洋参、虎杖等，批号：20010416；阳性对照药阿昔洛韦为中德合资天津赫素制药有限公司生产，批号：XF-19990002。12病毒用于生殖器疱疹模型的HSV2 Sav株从中国预防医学科学院引进，实验用病毒毒力为10－７TCID５０。13实验方法131动物和分组Hartly豚鼠，雌性，体重为(200±20)g，购自第一军医大学实验动物中心，合格证号为：粤检证字第2000B018号。将24只动物预先取阴道分泌物做单纯疱疹病毒(HSV)核酸定性检测，排除HSV感染后，随机分为4组：A组为抗病毒1号组，B组为抗病毒2号组，C组为阿昔洛韦组，D组为模型对照组。132豚鼠生殖器疱疹模型［２-３］的复制先用生理盐水清洗豚鼠外阴，再用粗糙的细玻璃棒摩擦阴道粘膜数次，继之用1mL注射器吸取015mLHSV2 Sav病毒液，配上灌胃针头伸入豚鼠阴道内约3～4cm处，将病毒液注入阴道穹隆后缓慢退出，最后用明胶海绵塞入阴道口以维持病毒液。133给药方法A、B、C组豚鼠分别于造模后4d给予抗病毒1号942g・kg－１・d－１、抗病毒2号833g・kg－１・d－１、阿昔洛韦841mg・kg－１・d－１，5次/d；D组给予生理盐水2mL・d－１，以上各组连续灌胃9d。134电镜观察在接种病毒后的13d，A、B、C组各随机取3只豚鼠，同时另取1只正常豚鼠做对照。腹腔麻醉后主动脉灌注浓度为40g/L多聚甲醛，固定组织，直至颈部、四肢僵硬后处死，无菌操作下取大脑组织、脊神经节、宫颈上皮作电镜标本，观察其超微结构的变化及是否有病毒颗粒的存在。2结果21正常豚鼠大脑皮质、脊神经节、宫颈上皮细胞的超微结构大脑皮质：细胞核呈圆形或椭圆形，核膜光滑平整，内外核膜清晰可见；高尔基体呈扁平囊状，形态规则；线粒体嵴排列整齐，无肿胀；内质网中等数量，无扩张及脱颗粒；脊神经节：各细胞器大小形态均正常；宫颈上皮细胞：为单层的柱状上皮细胞，排列整齐，基底部与基膜相连，表面有微绒毛，相邻细胞间可见紧密连接，胞核形态多不规则，近腔面有分泌颗粒，胞质中还可见线粒体、内质网与脂滴(图1)。22有病毒颗粒标本的超微结构的变化在A、B、C、D 4组中，每组豚鼠脊神经节标本中各有1例可找到HSV2病毒，病毒都是近细胞核分布，直径大小约150～180nm，中央区电子密度较高。从形态上看各组标本的病毒形态无明显区别，但在相同放大倍数下可辨认的病毒个数有差异，细胞超微结构也有差别。A组核膜模糊有切迹，线粒体不完整，嵴排列模糊不清，内质网减少，脂褐素增多，在25K下可见3个病毒颗粒，在12K下可见4个病毒颗粒；B组细胞核不规则，核膜模糊有切迹，呈不典型凹凸不平，线粒体肿胀，高尔基体扩张，脂褐素增多，在25K下可见3个病毒颗粒，在12K下可见4个病毒颗粒；C组核膜模糊不清，凹凸明显，线粒体肿胀，高尔基体扩张，内质网脱膜，溶酶体较多，在25K下可见5个病毒颗粒，在12K可见6个病毒颗粒；D组核膜模糊凹凸明显，线粒体高度肿胀破裂，嵴排列模糊不清，高尔基体扩张，内质网脱膜、脱颗粒，脂褐素明显增多，在25K下可见5个病毒颗粒，在12K可见9个病毒颗粒(见图1)。23无病毒颗粒标本超微结构变化在没有发现病毒颗粒的各组标本中，大脑皮质、脊神经节、宫颈上皮的超微结构与正常组对照，大部分表现为胞核形态不规则、核膜模糊、线粒体肿胀、高尔基体扩张、溶酶体增多；与有病毒颗粒的标本相比破坏程度相对较轻；A、B、C组与D组相比程度上较轻；A、B、C各组超微结构相比无明显差异。3讨论为了观察HSV2感染豚鼠后大脑皮质、脊神经节、宫颈上皮超微结构的病理改变及中药抗病毒胶囊对其病理改变的影响，探讨抗病毒胶囊治疗生殖器疱疹的作用机理，我们进行了透射电镜的观察实验。罗氏［４］曾用HSV2在小鼠右侧脑室注射，造成疱疹性脑炎模型后，发现电镜下小鼠组织出现线粒体变性坏死、粗面内质网扩张的超微结构的改变。我们的电镜观察结果中超微结构的改变与罗氏结果相似，并在脊神经节中发现了HSV2病毒颗粒，宫颈上皮和大脑皮质没有发现病毒颗粒，与HSV2经外阴沿周围神经向心性移行到脊神经节中潜伏，并造成脊神经节感染［５］的观点一致。观察结果同时显示，虽然短时间抗病毒治疗不能完全清除HSV2感染，但可以减少脊神经节病毒颗粒的数量，减轻病毒对脊神经节细胞超微结构的损害程度，表明中药抗病毒胶囊对豚鼠生殖器疱疹动物模型的病理改变有一定治疗作用，其详细机理有待进一步研究。参考文献：［１］范瑞强，池凤好，陈永锋，等．中药抗病毒胶囊治疗复发性生殖器疱疹139例临床观察［Ｊ］．中医杂志，2002，43(9)：679.［２］Kern E R,Glasgow L A,Overall J G,et al.Treatment of experimental herpesvirus infections with phosphonoformate and some comparisons with phosphonoacetate［Ｊ］．Antimicrob Agents Chemother,1978,14:817.［３］Zheng Z M,Hsiung G D.Complementrequiring neutralizing antibody in guinea pigs with primary and recurrent genital herpes［Ｊ］．Proc Soc Exp Biol Med,1984,177:332.［４］罗军，刘振安，杨占秋，等．单纯疱疹病毒致病模型的研究［Ｊ］．中国病毒学，1997，12(4)：309.［５］郑志明．单纯疱疹病毒2型在豚鼠脊髓中潜伏感染的证明［Ｊ］．中华医学杂志，1995，10(5)：584.