产蛋鸡TGE免疫和蛋黄抗体制备与ELISA的建立及其对白细胞介素动物医学论文.doc

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产蛋鸡TGE免疫和蛋黄抗体制备与ELISA的建立及其对白细胞介素_动物医学论文【中文摘要】本文成功建立了检测猪传染性胃肠炎(TGE)蛋黄抗体的酶联免疫吸附分析方法(ELISA);并用TGE-PED(猪流行性腹泻)二联灭活苗、弱毒苗免疫伊莎蛋鸡来制备蛋黄抗体,及高免蛋黄粉;用间接ELISA方法检测血清及蛋黄液中抗体效价,以研究其消长规律,同时也测定了喷雾干燥后蛋黄粉的效价;最后,探讨了免疫鸡血清中甲状腺激素和白细胞介素-Ⅱ的变化。1.检测猪传染性胃肠炎(TGE)蛋黄抗体的酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的建立用ELISA方法检测猪的抗TGE抗体的报道较多,但检测TGE蛋黄抗体的间接ELISA方法尚未见报道。本试验用TGE病毒颗粒作为抗原,用方阵试验确定抗原最佳包被浓度为82ng/ml,建立了检测TGE多克隆蛋黄抗体的间接ELISA方法,并对其稳定性进行了检验,结果表明,抗原包被浓度为82ng/ml时,检测鸡的阳性血清具有良好的特异性,而对阴性血清有较小的本底反应(效价在1:20以下),稳定性试验也表明,该方法具有较好的稳定性:如板间误差(n=3)为2.9%(阳性对照)、10.8%(阴性对照);板内误差(n=4)为5.3%(阳性对照)、3.2%(阴性对照)。2.两种疫苗先后免疫后鸡血清和蛋黄抗体的变化及TGE蛋黄粉的制备试验选用18只200日龄的健康产蛋鸡,按体重分为试验组、对照组,各9只,单笼饲养,饲养条件相同。先用猪TGE-PED二联灭活苗三次免疫试验组,琼脂扩散试验在试验鸡血清中未检测到抗体;改换猪TGE-PED二联弱毒苗三次免疫后,琼脂扩散试验已在5只鸡血清中监测到了抗体;分别于试验的第0、30、83、133、155、171、185、208和232天,对试验和对照组采集并分离血清,并于第171、179、185、195、199、208、232、266、295、326和361天收集蛋黄液,比较血清及蛋黄液中抗体效价动态变化及消长规律。结果表明:TGE-PED二联弱毒苗表现出比TGE-PED二联灭活。