姜炭止血有效部位的实验研究药学论文.doc

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姜炭止血有效部位的实验研究_药学论文作者：薛兴阳1，孟江2，卢国勇2，廖华卫2，黄曦【摘要】目的优选姜炭止血作用的有效部位。选取健康小鼠，给予姜炭不同极性部位的混悬液，用玻片法测凝血时间，筛选出有效部位，研究有效部位不同剂量对小鼠凝血时间的影响。结果与正常对照组比较，姜炭乙酸乙酯部位和水部位的高剂量组分别缩短小鼠凝血时间30.82%和28.46%，均与阳性对照药三七相当。石油醚和正丁醇部位对小鼠的凝血时间没有影响。结论姜炭乙酸乙酯部位、水部位的高剂量有较好的止血作用，为姜炭止血的有效部位。【关键词】姜炭;止血;有效部位China;2.Guangdong Pharmaceutical College,Guangzhou,Guangdong 510006,China)Abstract:Objective Study the active hemostatic components of baked ginger in mice.Methods The mice were administered with different suspensions of baked ginger extracted with different solvents.Slide method was used to evaluate the coagulation effects of active hemostatic components of baked ginger in mice.Result Suspensions of baked ginger extracted with ethyl acetate and water extract could decrease the coagulation time by 30.82%and 28.46%at high doses respectively.The effects were similar to those of suspension of notoginseng powder that was used as the positive control.Conclusion Suspensions of baked ginger extracted with ethyl acetate and water at high doses demonstrated hemostatic effects.Key words:ginger carbo;hemostatic;the effective components中药炭药在我国已有2 000多年的历史，是一种用途较广、疗效确切的中药炮制品。中医有“血见黑止，红见黑止”的传统炭药止血理论。姜炭味苦、涩，性温。归脾、肝经，用于血痢、血崩、产后腹痛、吐血、疟疾，长于止血温经[1]。姜炭在临床应用广泛，但关于姜炭的研究比较少，仅有研究报道姜炭能显著地缩短小鼠的凝血时间[2-3]，姜炭醚提物、水煎液、混悬液有明显缩短小鼠凝血时间的倾向[4]。但关于姜炭止血的作用部位和化学成分没有进行系统的研究。本文拟通过药理实验对姜炭石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取部位进行初步筛选，寻找其止血作用的部位，为进一步研究其有效止血成分及止血机理奠定基础。1实验仪器与材料1.1实验动物健康NIH小鼠130只，SPF级，雌雄各半，体质量(20±2)g。由广东省医学实验动物中心提供(合格证号:2007A004)，许可证号：SCXK(粤)2008-0002。1.2药材与试剂1.2.1药材干姜购于广州致信中药饮片有限公司，批号090901，经鉴定为姜科植物Zingiber officinale Rosc.的干燥根茎。姜炭：取干姜片，按《中国药典》2010年版一部附录Ⅱ(D)姜炭项下经炒炭法炒至表面焦黑色，内部棕褐色，通体鼓起为度，取出，灭尽火星，放凉即得[1]。三七购于鹤山市广增中药饮片有限公司，批号080101，经鉴定为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。1.2.2试剂石油醚、乙酸乙酯、正丁醇均为分析纯(天津市富宇精细化工有限公司);水为纯水。1.3仪器AY120托盘点子天平(日本岛津);实验室用超纯水机;机械秒表(上海星钻秒表有限公司);TC恒温电热套(海宁市华星仪器厂)。2方法与结果2.1供试药品的制备三七粉混悬液的制备：三七适当粉碎过80目筛后称取10 g，加50 mL水配成0.2 g/mL混悬液，冰箱贮存备用。姜炭不同提取部位溶液的制备：姜炭适当研磨粉碎后精密称取25 g，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水各200 mL溶剂，按极性由小到大的次序回流提取60 min，每次提取完后药渣晾干再用下一个溶剂提取，各部位提取物低温减压回收溶剂，浓缩至浸膏状，分别用0.8%吐温80溶液50 mL配成0.5 g/mL姜炭(石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水)的混悬储备液，冰箱贮存备用。剂量转换：《中国药典》规定干姜用量3～10 g，人按60 kg计算，选择剂量为10 g，换算为0.17 g/kg，人∶小鼠=1∶12(小剂量)，实验选择48倍剂量;由人的0.15 g/kg换成小鼠(48倍)得8 g/kg。一般小鼠灌胃剂量：0.2 mL/10 g→20 mL/kg，由8 g/kg及20 mL/kg换算得8 g/20 mL=0.4 g/mL。分别取不同的混悬储备液4 mL、2 mL和1 mL，用0.2%吐温80溶液定容于5 mL容量瓶中，配成质量浓度为0.4、0.2、0.1 g/mL的高、中、低剂量的混悬溶液。2.2姜炭有效止血部位的筛选取小鼠50只，雌雄兼用，随机分为正常对照组、石油醚组、乙酸乙酯组、正丁醇组和水组，每组10只。按8 g/kg灌胃，对照组给予同体积的0.8%吐温80，45 min后用毛细管从小鼠眼内眦球后静脉丛取血，滴2滴于洁净的玻片上，开始计时，每隔30 s用干净针头从血滴边缘向中间挑动1次，观察，直到血丝出现为止，记录时间。与正常对照组比较，计算缩短率，结果见表1。结果显示，与对照组比较，姜炭水提取物和乙酸乙酯提取物可显著缩短小鼠凝血时间(P<0.01)，缩短率分别为32.74%和43.27%。石油醚和正丁醇提取物与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)，初步筛选出姜炭的水和乙酸乙酯部位提取物为止血的有效部位。2.3姜炭有效部位不同浓度对小鼠凝血时间的影响取小鼠80只，雌雄兼用，随机分为8组，每组10只，称质量并做好标记：①正常对照组;②乙酸乙酯部位高剂量组;③乙酸乙酯部位中剂量组;④乙酸乙酯部位低剂量组;⑤水部位高剂量组;⑥水部位中剂量组;⑦水部位低剂量组;⑧阳性对照组：三七溶液组。按照0.2 mL/10 g小鼠质量灌胃给药，三七水溶液按2.4 g/kg(高剂量组)灌胃，对照组给予同体积0.8%吐温80溶液，45 min后按上法测定小鼠凝血时间和缩短率，结果见表2。结果显示，与正常对照组相比姜炭的水部位和乙酸乙酯的高剂量组止血效果较显著(P<0.01)，缩短率分别为30.82%和28.46%;水部位中剂量有止血效果但不明显，缩短率为13.98%;水部位低剂量组和乙酸乙酯的中低剂量组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05)。水部位高剂量组和乙酸乙酯高剂量组接近三七组(高剂量)的止血效果(P>0.05)。表1姜炭不同提取部位对小鼠凝血时间的影响表2姜炭有效部位不同浓度对小鼠凝血时间的影响3讨论凝血时间的测定方法通常有载玻片法和毛细管法，通过预实验玻片法测量方法较稳定，毛细管比较难把握凝血时间，以致数据稳定性差，故此实验采用玻片法。给药后采血的时间一般为30～60 min，为此对给药后30、45、60 min采血时间进行优化，结果发现给药后45 min取血凝血时间较稳定，故选择给药后45 min进行采血。本实验结果表明，姜炭中石油醚、正丁醇部位没有缩短小鼠凝血时间的倾向;乙酸乙酯、水部位高剂量组能显著缩短小鼠凝血时间，其凝血效果与三七水煎液效果比较接近，说明姜炭的乙酸乙酯、水部位为姜炭止血的有效部位。炭药止血的机理目前认为有炮制后鞣质、钙离子和微量元素含量增加、生成一定数量的炭素(活性炭)、产生新的成分等[5]，课题组研究发现姜炭的薄层层析和GCMS指纹图谱中发现有不同于干姜、炮姜的新的成分出现，有可能为姜炭止血的有效成分。下一步将进一步对姜炭的有效部位进行成分分析，阐明止血的药效物质基础。【参考文献】[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版一部[M].北京：中国医药科技出版社，2010：14.[2]李文圣，熊慕兰.炮姜与姜炭的实验研究[J].中成药，1992，14(12)：22-23.[3]吴建华，马耀茹.姜不同炮制品止血作用实验研究[J].陕西中医，2002，23(5)：449-450.[4]吴皓，叶定江，赵玉珍，等.姜炮制品对小鼠凝血时间的影响[J].中国中药杂志，1993，18(3)：147-149.[5]满达，白音夫.炭药研究[J].中国民族医药杂志，2009，(6)：35-36.