清肝片的质量标准研究药学论文.doc

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清肝片的质量标准研究_药学论文【关键词】,清肝片；,,甘草酸；,,薄层色谱；,,高效液相色谱摘要：目的建立清肝片的质量标准。方法采用薄层色谱法鉴别板蓝根、茵陈和甘草;采用高效液相色谱法测定样品中甘草酸的含量,高效液相的色谱条件为：Agilent Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相为甲醇-0.2 mol・L-1醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1）。结果薄层鉴别专属性强，高效液相色谱法甘草酸铵在0.36～1.80μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率98.33%，RSD为1.24%。结论该方法可更好地控制清肝片的质量。关键词：清肝片；甘草酸；薄层色谱；高效液相色谱Quality Standard of Qinggan Tablet Abstract：ObjectiveTo establish the quality standard of Qinggan Tablet.MethodsTLC was used to identify Radix Isatidis,Herba Artemisiae Scopariae and Radix Glycyrrhizae;and HPLC was used to determine the content of Glycyrrhiziate acid.Agilent Eclipse XDB-C18 column（4.6 mm×250 mm，5μm）with mobile phase of methanol-0.2 mol・L-1 ammonium acetate solution-glacial acetic acid(67∶33∶1)was used for the determination of puerarin.ResultsThe TLC for identification was special and the linear range of puerarin was 0.36～1.80μg and recovery rate was 98.33%,RSD was 1.24%,respectively.ConclusionThis method can be used to control the quality of Qinggan Tablet better.Key words：Qinggan Tablet；Glycyrrhiziate acid；TLC；HPLC清肝片是由板蓝根、茵陈、甘草3味中药组成，具有清热解毒、疏肝退黄的功效，用于急、慢性肝炎［1］。为了有效控制该产品的质量，对方中板蓝根、茵陈、甘草进行了定性鉴别，采用HPLC法测定甘草中主要活性成分甘草酸的含量，结果方法简便，准确，重现性好，可适用于该制剂的质量控制。1仪器与试药1.1仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪,Agilent1100化学工作站；CQX25-06超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。1.2试药清肝片(广西玉林制药有限责任公司生产);甘草酸铵对照品（供含测用,批号:110731-200510），靛玉红与靛蓝对照品，板蓝根、茵陈、甘草对照药材均由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。2定性鉴别2.1茵陈取本品6片，除去糖衣，研细，加甲醇10 ml浸渍30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，作为供试品溶液。另取茵陈对照药材1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含0.5 g的对照药材溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺茵陈的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VIB）实验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60~90℃）-醋酸乙酯-丙酮（5∶3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以浓氨水，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同蓝色的荧光斑点（阴性对照无干扰）。见图1。2.2甘草取本品15片，除去糖衣，研细，称取2 g，加乙醇25 ml，超声提取30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml溶解作为供试品溶液。另取甘草对照药材1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含0.5 g的对照药材溶液，再按标准处方比例和制备方法制备缺甘草的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VIB）实验，吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液（5∶1∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上显相同橙黄色的斑点（阴性对照无干扰）。见图2。2.3板蓝根取本品10片，除去糖衣，研细，用三氯甲烷20 ml超声处理30 min，提取液置蒸发皿中蒸干，残渣加三氯甲烷2 ml溶解，作为供试品溶液。另取板蓝根对照药材1 g，按供试品溶液提取方法制备成每毫升含0.5 g的对照药材溶液，再分别取靛玉红与靛蓝对照品适量，加乙醚制成每毫升含靛玉红0.5 mg、靛蓝0.6 mg的溶液，作为对照品溶液。再按标准处方比例和制备方法制备缺板蓝根的阴性样品，然后按供试品溶液提取方法制备成阴性对照液。照薄层色谱法（《中国药典》2005年版Ⅰ部附录VIB）实验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，石油醚(60~90℃)-醋酸乙酯-丙酮(7∶0.5∶2.5)［2，3］为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照药材、对照品相应的位置上，分别显相同颜色的斑点（阴性对照无干扰），见图3。3甘草酸的含量测定3.1色谱条件Agilent Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相：甲醇-0.2mol・L-1醋酸铵溶液-冰醋酸（67∶33∶1），流速：1.0 ml・min-1；检测波长：250 nm；柱温：28℃；进样量：10μl。理论塔板数按甘草酸铵计算应不低于3 000。3.2对照品溶液的制备精密称取甘草酸铵对照品18 mg，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成每毫升含0.180 mg的对照品贮备液(相当于每毫升含甘草酸0.176 3 mg)。精密吸取该贮备液3.0 ml，置5 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，制成每1ml含0.108 mg的对照品溶液。3.3供试品溶液的制备取本品24片，除去糖衣，研细，称取约1.2 g，精密称定,置具塞锥形瓶中，精密加入流动相30 ml，密塞,称定重量,浸泡1 h，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量,摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液经0.45μm滤膜滤过，作为供试品溶液。图1茵陈TLC（略）图2甘草TLC（略）图3板蓝根TLC（略）3.4空白实验按处方及制备工艺制备不含甘草药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。按照上述色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰（见图4~6）。因此可在此系统条件下对甘草酸进行定量分析。图4对照品色谱图（略）图5供试品色谱图（略）图6阴性对照色谱图（略）3.5线性关系考察精密吸取3.2项的对照品贮备液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 ml，分别置于10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10μl，注入液相色谱仪,记录峰面积,以对照品进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=1.302 8×103X-5.866 8;r=0.999 9，甘草酸铵在0.36～1.80μg范围内呈良好的线性关系。3.6精密度实验精密吸取同一供试品溶液，按上述色谱条件进行分析，重复进样6次,结果峰面积均值为850.94，RSD=0.98％。3.7重复性实验平行制备清肝片(批号为541003)的供试品溶液6份,照3.1项下的色谱条件进行测定，结果平均含量0.453 8 mg/片,RSD=1.25％。3.8稳定性考察精密吸取供试品溶液10μl，分别在0，2，4，6，8，10，12 h进样一次，测定峰面积，RSD=1.05%。表明供试品溶液在12 h内稳定。3.9加样回收率实验称取已知含量为0.445 1 mg/片的清肝片除包衣药粉0.6 g,精密称定,分别精密加入浓度为0.180 mg・ml-1的对照品贮备液3.5，3.5，5.0，5.0，6.5，6.5 ml，照3.3项下制备供试液，依法测定，计算回收率。结果见表1。表1甘草酸加样回收率计算结果（略）3.10样品测定按3.2和3.3项方法分别制备对照品溶液和供试品溶液，按上述色谱条件，精密吸取10μl，注入色谱仪，测定。结果见表2。表2样品测定结果（略）4讨论4.1本标准对制剂中的板蓝根、茵陈、甘草进行了薄层鉴别，结果与对照品或对照药材斑点一致，效果较好。其中在板蓝根薄层鉴别中选用甲醇为溶媒,靛蓝斑点不明显,而选用三氯甲烷为溶媒时,靛玉红靛蓝斑点清晰；鉴别茵陈时,选用5%的氢氧化钾为显色剂,阴性有轻微干扰,经多次试验发现是甘草干扰，当选浓氨水作为显色剂时,阴性干扰消失；在甘草薄层鉴别中,曾参考文献［4，5］中的展开剂，但效果都不理想，经摸索用醋酸乙酯-丙酮-无水乙醇-氨试液（5∶1∶2∶1）比较好，氨试液要求临用新配。4.2在提取过程中，曾用甲醇、流动相、稀乙醇三种不同的溶剂提取清肝片，结果用流动相作为提取溶剂时，得到的色谱峰峰形较好，能达到基线分离。同时比较了浸泡与不浸泡的提取，结果先浸泡一个小时再超声处理，提取得到的甘草酸含量更高。4.3采用甘草酸铵作为对照品，因为在流动相含有醋酸的条件下，甘草酸铵和甘草酸的保留时间是一致的，在计算含量时，需将甘草酸铵的量折算成甘草酸的量，因此不影响测定结果。参考文献：［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］．北京：化学工业出版社，2005：59.［2］宗玉英,党合群,杨风梅.薄层扫描法的测定复方板蓝根胶囊中靛玉红含量［J］.青海医药杂志,2000,30(3):52.［3］张玉蛾,李献州.薄层-紫外法测定咽炎合剂中齐墩果酸、靛蓝、靛玉红的含量［J］.中成药,1999,21(4):205.［4］陈平，戴忠，高咏莉，等.糖尿灵片的质量标准研究［J］.中成药，2005，27（8）：903.［5］孙守景，高剑峰，李兰忠，等.加味酸枣仁合剂质量控制方法的研究［J］.中国中医药信息杂志，2005，12（6）：44.