大红袍妇炎宁胶囊治疗大鼠盆腔炎的实验研究临床医学论文.doc

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大红袍妇炎宁胶囊治疗大鼠盆腔炎的实验研究_临床医学论文作者：卢泽恺，曹恒仪，黄勇攀,张晴，叶兰，李诚秀【摘要】目的：观察大红袍妇炎宁胶囊（DHPJN）的体外抑菌作用和对盆腔炎的治疗作用，为其临床应用提供实验依据。方法：(1）抑菌试验测定DHPJN的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）；(2）建立大肠埃希菌大鼠慢性盆腔炎模型和注射肾上腺素的大鼠血瘀模型，观察DHPJN的治疗作用。结果：DHPJN对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌、普通变形杆菌及淋病奈瑟菌均具有抑菌作用，减轻大鼠细菌性盆腔炎子宫肿胀程度及炎性损害，降低血瘀症大鼠的全血黏度、红细胞聚集指数及红细胞电泳指数。结论：DHPJN对大鼠盆腔炎有治疗作用。【关键词】盆腔炎性疾病；血瘀；大红袍妇炎宁胶囊；大鼠，SpragueDawley［Abstract］Objective:To observe the bacteriostatic action of Dahongpao Capsule(DHPC)in vitro and its therapeutical effect to pelvic inflammatory disease in rats,so as to provide references for the clinical application.Methods:（1)Minimal inhibitory concentration（MIC）and minimal bactericidal concentration（MBC）of DHPC were determined by bacteriostasis experiments；（2)Pelvic inflammatory disease model of rats was established by injection of colibacillus,and blood stasis model made by injection of adrenalin.The rat models were treated with DHPC and the curative effects was observed.Results:DHPC inhibited the growth of Staphylococcus aureus,betahemolytic streptococci,Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa,Shigella sonnel,Bacterium vulgare,and Diplococcus gonorrhoeae,relieved bacteric pelvic inflammation caused uterus swelling and inflammatory injury,and decreased whole blood viscosity,erythrocyte aggregation index and erythrocyte electrophoresis index of disease rats with blood stasis.Conclusion:DHPC have therapeutical effect on pelvic inflammatory disease in rats.［Key words］pelvic inflammatory disease;blood stasis;Dahongpao capsule;rats,SpragueDawley盆腔炎是女性内生殖器及其周围的结缔组织、盆腔腹膜发生的炎性疾病，常因细菌感染所致。西医治疗盆腔炎以抗菌为主，辅以抗炎及支持疗法。急性盆腔炎多采用抗生素治疗，选用敏感的抗菌药物进行针对性治疗；慢性盆腔炎因组织中已经基本没有病原菌的感染，或病原菌对药物耐药性形成，通常采取综合疗法,并联合理疗或手术方法[1]。中药通过标本兼治可达到抗菌消炎,改善组织微循环的效果，对急、慢性盆腔炎的治疗具有一定的优势。2007年用中药复方制剂大红袍妇炎宁胶囊（DHPJN）对盆腔炎的作用进行实验研究，以期为其临床应用提供实验依据。1材料和方法1.1材料1.1.1实验动物雌性SD大鼠，体重250～280 g，由贵阳医学院实验动物中心提供，合格证号SCXK（黔）2002-0001。1.1.2实验药品、试剂和仪器大红袍妇炎宁胶囊，贵阳天阳生物技术开发有限公司（批号20060301）；金黄色葡萄球菌（ATCC 26112-5）、乙型溶血性链球菌（ATCC 32210）、大肠埃希菌（ATCC 25922）、铜绿假单胞菌（ATCC 35218）、宋内志贺菌、淋病奈瑟菌（ATCC 29106）、普通变形杆菌及白色念珠菌（ATCC 10231），由贵阳医学院微生物学教研室提供。LYBN6A自清洗旋转式研度计、LYBF200A微量血浆测试仪为北京普利生仪器股份有限公司产品。1.2方法1.2.1 DHPJN的体外抑菌实验1.2.1.1抑菌试验纸片扩散法[2]。将含有定量DHPJN的纸片贴在已接种上述菌种的琼脂平板上，37℃培养24 h，观察细菌生长情况。1.2.1.2最低抑菌浓度（MIC）稀释法[2]。用稀释菌种109个/ml的菌液，分别接种于含不同浓度DHPJN的培养基或不含DHPJN的培养基上,37℃培养，24 h后观察细菌的生长情况，测定MIC。1.2.1.3最低杀菌浓度（MBC）取MIC试验中无菌生长的接种细菌处的琼脂块，接种于不含DHPJN的相应培养基上,37℃培养，24 h后观察细菌的生长情况，测定MBC。1.2.2 DHPJN对大鼠大肠埃希菌子宫炎的影响取雌性SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只：假手术组，模型组，DHPJN低、中、高剂量给药组（0.29、0.58、0.81 g/kg）。模型组及各给药组动物用30 mg/kg戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，剖腹于右侧子宫注入6×106/ml大肠埃希菌悬液0.1 ml,在注射菌液之前用注射针头机械损伤子宫内膜。假手术组动物麻醉后仅作开腹和关腹，不处理子宫[3]。造模后第10天开始给药，假手术组及模型组给等容生理盐水，每天上午灌胃给药1次，连续18 d。末次给药后24 h处死动物，摘取双侧子宫，检查以下指标[4]。1.2.2.1子宫肿胀程度取双侧子宫，电子天平称重，以左右两侧子宫重量差为肿胀程度指标，并计算肿胀率和抑制率。肿胀率=（右侧子宫重量-左侧子宫重量）/左侧子宫重量×100%；抑制率=（模型组子宫平均肿胀率-给药组子宫平均肿胀率）/模型组子宫平均肿胀率×100%。1.2.2.2子宫病理变化取双侧子宫，4%甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，观察及评定子宫的病理变化及炎症程度[4]。1.2.3 DHPJN对血瘀大鼠血液流变学的影响[5，6]雌性SD大鼠50只，随机分5组：对照组、模型组、DHPJN低、中、高剂量（0.27、0.54、0.81 g/kg）组。每天上午灌胃给药一次，对照组和模型组灌胃等容积生理盐水，连续用药7 d，末次给药后30 min，除对照组外，其余各组大鼠复制血瘀模型：皮下注射肾上腺素0.8 mg/kg，2 h后，将大鼠浸入冰水内5 min，4 h后再次皮下注射同量肾上腺素。禁食后于次晨取血检测全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数和红细胞电泳指数。1.2.4统计方法计数资料以(x±s)表示,采用SPSS 11.5统计软件,单因素方差分析(OneWay ANOVA),各组间两两比较采用LSD法，等级资料采用Ridit法，以P<0.05为差异显著性。2结果2.1 DHPJN的体外抑菌试验抑菌作用见表1。DHPJN对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌、普通变形杆菌及淋病奈瑟菌的MIC分别为5、20、20、2、20、20及2 g/L，MBC分别为5、100、20、5、20、20及2 g/L。表1 DHPC的抑菌试验结果（略）2.2 DHPJN对大鼠大肠埃希菌子宫炎的影响2.2.1子宫肿胀程度见表2，DHPJN低、中剂量组的感染子宫肿胀程度与模型组比较差异不明显,高剂量组子宫肿胀程度较模型组明显减轻。2.2.2子宫病理变化光镜下观察，假手术组大鼠子宫腔光滑、无粘连闭锁或扩张；子宫腔壁各层结构正常，分层清楚；上皮细胞无变性坏死，无慢性炎细胞浸润，无内膜充血水肿（图1）。模型组大鼠感染侧子宫有不同程度宫腔粘连、闭塞或扩张；子宫腔壁结构紊乱，腔壁黏膜固有腺体消失，分层结构不清；可见上皮细胞变性坏死，有散在或层状性炎细胞浸润，内膜充血水肿（图2）。DHPJN高、中、低剂量组感染子宫的炎性病变减轻（图3～5），与假手术组比较有显著性差异。按各层组织结构改变的程度将子宫炎症程度定为4级：无、轻度、中度、重度（表3），结果表明DHPJN对慢性盆腔炎模型大鼠的子宫病理变化有一定的治疗作用。表2 DHPJN对大鼠子宫肿胀率及抑制率的影响(略)表3 DHPJN对大鼠子宫病理变化的影响(略)注：(1)与假手术组比较，P<0.01；(2)与模型组比较，P<0.01。2.3 DHPJN对血瘀模型大鼠血液流变学的影响结果显示，DHPJN低、中、高剂量组全血黏度、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数均有降低（表4），表明DHPJN能减轻血瘀症大鼠血液的黏、浓、凝、聚状态，有活血作用。表4 DHPJN对血瘀证模型大鼠血液流变学的影响（略）注：(1)与对照组比较P＜0.01；与模型组比较,(2)P＜0.05，（3）P＜0.01。3讨论盆腔炎是妇科常见病和多发病之一。人类慢性盆腔炎多数为细菌感染所致，其中大肠埃希菌是引起慢性盆腔炎的主要病原微生物。实验选用了多种常见的盆腔炎致病菌进行体外抑菌实验，结果表明，DHPJN对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、宋内志贺菌、普通变形杆菌及淋病奈瑟菌均具有一定的抑菌作用。为进一步证实DHPJN的作用，选用大肠埃希菌为致病菌，用注射针头造成子宫内膜机械损伤，建立慢性盆腔炎模型。结果表明，模型组大鼠大肠埃希菌感染子宫明显肿胀，与未感染的假手术组大鼠子宫比较有明显差异（P＜0.01）；光镜检查显示，模型组大鼠感染侧子宫有宫腔粘连、闭塞或扩张，子宫腔壁结构紊乱，可见上皮细胞变性坏死，有炎细胞浸润，内膜充血水肿，与假手术组大鼠子宫比较有明显差异（P＜0.01），表明此盆腔炎模型成功。与模型组比较，DHPJN高剂量组可减轻大鼠感染子宫肿胀程度（P＜0.05），肿胀抑制率达51.33%。光镜检查见DHPJN高、中、低剂量组感染子宫的炎性病变较模型组明显减轻（P＜0.01）。现代中医研究证实，慢性盆腔炎患者处于血淤状态，血液发生了“黏、浓、凝、聚”现象，导致血液瘀滞，血液循环障碍。中医认为血瘀的病因病机是阳虚寒凝[7]，实验观察了DHPJN对大鼠急性血瘀模型血液流变学的影响，结果显示，DHPJN可降低全血黏度、红细胞聚集指数、红细胞电泳指数，与模型组比较有明显差异（P＜0.05，P＜0.01），提示DHPJN可减轻血瘀症大鼠血液的黏、浓、凝、聚状态，活血化瘀。上述实验研究可见，DHPJN具有一定的抗菌作用，能减轻大肠埃希菌性子宫炎的病变，对细菌性盆腔炎有一定的治疗作用。DHPJN对急性血瘀症大鼠有活血化淤作用，有利于炎症组织的自身修复。【参考文献】[1]陈奇.中药药效研究思路与方法[M].北京：人民卫生出版社，2005：854-855.[2]徐淑云，卞如濂，陈修．药理实验方法学[M].3版.北京：人民卫生出版社．2002：1651-1657.[3]闻莉,张三元,李莉，等.大鼠慢性盆腔炎模型的技术要求及模型特点[J].浙江中西医结合杂志,2001(8):484-486.[4]刘国生,王桐生,龙子江,等.盆腔炎冲剂对大鼠慢性盆腔炎模型的影响[J].中国实验方剂学杂志,2004(3):24-25.[5]陈奇.中药药理研究方法学[M].2版.北京：人民卫生出版社,2006:554-555.[6]金楠，周莉.三七花中总皂苷对大鼠血液流变学的影响[J].中国药师，2007（12）：1193-1195.[7]严常开，刘惟莞,敖英，等.丹参素胶囊活血化瘀作用的实验研究[J].中成药,2003(8):637-639.