妊娠组织中转化生长因子及其受体与早期复发性自然流产相关性研究临床医学论文.doc

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妊娠组织中转化生长因子及其受体与早期复发性自然流产相关性研究_临床医学论文作者：韦枝红宁克勤龙淑芳徐小平【摘要】目的：了解转化生长因子β1（TGF-β1）及其受体（TβR、Ⅰ、Ⅱ）在绒毛及蜕膜组织中的表达情况，初步探讨（TGF-β1）及（TβR）与早期复发性自然流产（RSA）的关系。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术，检测38例RSA患者和35例正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中TGF-β1 mRNA，TβR（Ⅰ、Ⅱ型）mRNA的表达情况。结果：TGF-β1及TβR、Ⅰ、Ⅱ型在正常早孕及RSA绒毛、蜕膜组织中均有表达，TGF-β1在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为（0.18±0.02）、（0.12±0.01），对照组为（0.98±0.03）、（0.72±0.02）；TβR-Ⅰ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为（0.15±0.03）、（0.11±0.03），对照组为（0.71±0.01）、（0.73±0.01）；TβR-Ⅱ在RSA组绒毛及蜕膜组织中表达水平为（0.16±0.01）、（0.09±0.01），对照组为（0.68±0.02）、（0.86±0.02）；上述指标RSA组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。结论：TGF-β1及TβR在绒毛及蜕膜组织中表达下降可能是早期复发性自然流产的重要原因之一。【关键词】转化生长因子β1；受体；复发性自然流产；滋养细胞；蜕膜〔Abstract〕Objective To understand the expressions of transforming growth factorβ1(TGF-β1)and its receptors(TβR)in villi and decidua during early pregnancy and their effects on early recurrent spontaneous abortion.Methods Expressions of TGF-β1 mRNA and its receptors were detemined in villi and deciduas by semi-quantitative reverse transcriptional-polymerase chain reaction from 38 cases of spontaneous abortion women and 35 cases of normal early pregnancy women(control group).Results TGF-β1 and its receptors had expressioned in decidua cells,villis glands and interstitial cytoplasm in all two groups.The expressions of TGF-β1 in the villi and decidua of spontaneous abortion and control group were(0.18±0.02),(0.98±0.03)and(0.12±0.01),(0.72±0.02)respectively.The intensity of TβR-Ⅰin the villi and decidua of spontaneous abortion and control groups were(0.15±0.03),(0.71±0.01)and(0.11±0.03),(0.73±0.01)respectively.And the expressions of Tβ1R-Ⅱin the villi and decidua of spontaneous aboetion and control groups were(0.16±0.01),(0.68±0.02)and(0.09±0.01),(0.86±0.02)respectively.The differences between the control group and abortion group were all significant(P<0.01).Conclusion The expressions of TGF-β1 and its receptors in the early pregnancy tissues of aborted women declined.It demonstrates that the abnomal expressions of TGF-β1 and its receptors play an important role in spontaneous abortion,they are one of the causes of spontaneous abortion.〔Key Words〕Transforming growth factorβ;Receptor;Recurrent Spontaneous abortion;Trophoblasl;Decidua早期复发性自然流产（recurrcent spontaneous abortin,RSA）是指2次或2次以上的自然流产，其原因复杂，主要有遗传、内分泌、解剖、感染、免疫等因素，生殖免疫学认为妊娠是成功的半同种移植过程，正常妊娠体液免疫占主要优势，形成免疫内受，保护胚胎组织，而自然流产患者以细胞免疫为主，产生胚胎排斥作用，我们采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，分别对RSA患者及正常早孕妇女的绒毛及蜕膜组织中TGF-β1 mRNA及其受体表达情况进行检测，探讨其与RSA发病的关系。1资料与方法1.1研究对象2004年4月-2007年8月，在我院门诊就诊，连续2次或2次以上自然流产患者38例、年龄22~41岁，孕次2~5次，停经40~90 d并排除子宫畸形、感染、内分泌及夫妇染色体异常，既往无自然免疫性疾病史，选取同期正常早孕要求行人工流产35例作对照，年龄23~40岁孕次2~6次，停经45~80 d，对照组无不孕、自然流产、死胎等不良孕产史，两组年龄、孕周、孕次、停经天数无显著差异。1.2方法1.2.1标本采集复发性自然流产患者在确认胚胎停止发育或难免流产行清宫以及正常早孕B超证实宫内孕囊见心管搏动的孕妇行人工流产时，取绒毛及蜕膜组织，生理盐水漂洗，装入防冻管中待测。1.2.2方法采用RT-PCR技术检测绒毛、蜕膜组织TGF-β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）的mRNA，具体步骤参照参考文献[1，2]，RNA逆转录试剂盒购自美国GIBCO公司，引物由上海生物工程有限公司合成，应用瑞典生产LKB2202紫外凝胶扫描分析系统进行吸光度扫描，得出扩增产物灰度值（A），得到TGFβ1及TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA相对含量（扩增产物A值/参照系统βactin扩增产物A值×%）。1.2.3统计学处理各组测定值以均数±标准差表示采用SPSS 10.0统计软件对各组数据进行方差分析。2结果2.1两组绒毛组织中TGF-β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA的表达在两组绒毛组织中细胞滋养细胞及合体滋养细胞均有表达，RSA组表达明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.01）。见表1。2.2两组蜕膜组织中TGF-β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）mRNA的表达两组蜕膜腺体细胞及间质细胞中均有TGF-β1、TβR（Ⅰ、Ⅱ）阳性染色，RSA组表达明显低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.01），见表2。3讨论3.1正常妊娠组织中TGFβ及TβR的表达Simpson等利用免疫组化和原位杂交技术发现，TGFβ1及TβR分布于子宫内膜的腺体及间质中，其含量呈周期性变化，于月经周期的增生期含量最低，分泌期为增生期的2倍，妊娠早期的蜕膜中TGFβ含量为增生期的5倍，妊娠后TGFβ1刺激子宫内膜基质合成基质蛋白，使子宫内膜蜕膜样变，并刺激基质细胞合成甲状旁腺激素相关蛋白，促进滋养细胞将钙从母体运输给胎儿[3]，郝晶等[4]对着床小鼠子宫内膜中转化生长因子及其受体的研究亦证实了受孕子宫内膜表面上皮、基质细胞、蜕膜细胞中TGFβ1及TβR表达较未孕时显著增加。本研究显示正常早孕绒毛及蜕膜组织中均有大量的TGFβ1及TβR表达这与上述的实验结果相符，提示TGFβ1及TβR在维持正常早孕起着重要作用。3.2 TGFβ1及TβR的异常表达与复发性自然流产的关系作为同种移植物的胎儿能够耐受母体免疫防御而不被排斥，与母-胎界面形成的免疫平衡有关，一旦平衡被打破，则产生流产，而这种免疫平衡主要由绒毛及蜕膜合成的多种肽类细胞因子有关，其中TGFβ1是一种调节细胞生长、分化的多肽，它抑制免疫活性细胞的增殖，抑制巨噬细胞的激活以及自然杀伤（NK）细胞对干扰素γ的反应性；抑制某些因子如干扰素γ、TNFα的产生及活性，故TGFβ1主要起到免疫负调节作用，在正常妊娠过程中，它起到免疫抑制作用，使母体对胚胎排斥的免疫应答反应被封闭，使妊娠维持，同时TGFβ必须与特异性受体TβRⅠ、Ⅱ结合，才能发挥其调节信号传导的生物学功能[5]，同时TGFβ1还有促进细胞形态的发生、增殖、分化作用，并调节胚胎滋养层的分化；本研究显示：复发性自然流产患者绒毛及蜕膜组织中TGFβ1及TβR表达均较正常妊娠组下降，提示复发性自然流产患者TGFβ1及TβR水平降低，不能诱导免疫耐受，从而影响胚胎着床及胎盘形成，导致胚胎被母体排斥，也从蛋白水平印证了TGFβ1及其受体在早期胚胎发育中的作用，为自然流产的免疫治疗提供了一条新思路。【参考文献】〔1〕Cao Y,Ji WR,Qi P,et al.Placenta growth factor:identification and characterication of a novel isoform generated by RNA alternative splicing〔J〕.Biochen Biophys Res Commun,1997,235:493-498〔2〕姜泊,张亚历,周殿元.分子生物学常用实验方法〔M〕.北京:人民军医出版社,1996.282-300〔3〕Simpson H,Robson SC,Bulmer JN,et al.Transtroming growth factor beta expression in human Placenta and placental bed during early pregrency〔J〕.Placenta,2002,23:44-58〔4〕郝晶,高英茂,刘故,等.转化生长因子β1及其受体在着床期小鼠子宫内膜中的免疫组织化学研究〔J〕.解剖学报,2001,32:64-66〔5〕曹泽毅.中华妇产科学〔M〕.北京:人民出版社,1999.98-99。