分离培养法与胶体金法检测霍乱弧菌结果比较医学论文.doc

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分离培养法与胶体金法检测霍乱弧菌结果比较_医学论文【摘要】目的比较分离培养法与胶体金免疫层析法检测O1群霍结果1400份各类标本均为阴性，二种检测方法无统计学意义，一乱弧菌结果的一致性。方法从2009—2010年对1400份各类标本同时用分离培养法与胶体金法进行检测，比较二种方法结果的符合率。致性为优。符合率为100%。结论胶体金免疫层析法可作为快速检测霍乱弧菌的方法，其结果准确性高。有必要对胶体金免疫层析法快速检出的阳性菌标本进行培养分离检测，以保证既能及时防控疫情，又能获取菌株进行确诊和进行其他相关项目的研究。【关键词】胶体金免疫层析法分离培养法霍乱弧菌一致性快速、准确地诊断霍乱弧菌是防治霍乱病和保障食品安全中非常重要的环节。目前卫生部规定霍乱弧菌的检测以培养法为标准，该法适用于各种标本，但检测时间比较长。近年发展的胶体金免疫快速检测法可以快速检测霍乱弧菌标本，提高了诊断效率。我们对这二种检测方法结果的一致性进行了比较，现报道如下。1材料与方法1.1试剂：碱性蛋白胨水（杭州微生物试剂厂生产）；4号琼脂（杭州微生物试剂厂生产）；O1群霍乱弧菌多价血清、小川、稻叶分型血清、（均购自中国药品生物制品检定所）；霍乱弧菌胶体金免疫快速检测卡（郑州博赛生物技术有限公司生产）。试剂在有效期内使用。1.2样本来源：标本共1400份，其中600份为疑似霍乱病人粪便及剩余食物、碗、筷子、粪便污染泥土标本；卫生监督部门对生活污水采集标本400份、对海产品、水产品采集标本400份。1.3检测方法：将标本置于碱性蛋白胨水初增菌6-8h，作第二次增菌。按《霍乱防治手册》(第五版)[1，2]方法进行病原菌分离培养及血清鉴定。胶体金免疫层析法：将二次增菌液0.5ml加入稀释瓶内，用滴管反复吹打充分混匀，用滴管吸向检测卡的样品孔内滴加4滴样品液（约150μl），10mim-30 mim时观察结果。结果判断：以出现两条紫红色线条即质控线（C线）和反应带（T线）为阳性；只有C线为阴性；仅有T线或无线条出现为无效。2结果2.1各类标本霍乱弧菌检测结果：表1各标本霍乱弧菌检测结果2.2二种检测方法一致性检验：表2二种检测方法一致性检验一致性为优。胶体金法灵敏度为100%，特异度为99.86%，符合率为100%。3讨论卫生部标准中的培养分离法检测临床霍乱弧菌要先对标本进行碱性蛋白胨培养液增菌，然后分离鉴定[3]，完成微生物分离培养、形态学鉴定和生化分析，整个过程约需2-3天，操作环节多，工作量大而且费时，检测成本高[4]，不利于临床病例的快速诊断和外环境检测。近年来，PCR、荧光定量PCR作为快速检测技术应用越来越广泛，但这些技术在可以快速检测的同时，也存在不足，如其检测所需仪器特殊而昂贵，检测费用较高，无法在霍乱监测现场使用[5]。胶体金免疫层析法是近年来发展出的一种快速检测卡检验方法，只要细菌抗原达到足够量，就能很快得出阳性结果，操作简单方便，判读结果容易，可迅速报告结果[6]，无需任何特殊仪器设备，只用一张检测卡，就可在10min-30 min内作出疫情初报。我们通过用培养分离法与胶体金免疫层析法，同时对1400份标本进行霍乱弧菌检测，发现二种检测方法无统计学意义，一致性为优，胶体金法灵敏度为100%，特异度为99.86%，符合率为100%。同时，我们也注意到，胶体金免疫层析法在快速出结果报告时，不能对霍乱弧菌进行形态学鉴定和血清分型，对疾病流行的防控和霍乱弧菌的进一步分型造成影响[7]，因此，有必要对胶体金免疫层析法快速检测的标本进行培养分离鉴定。虽然本次检测的所有标本在4号琼脂平板上均无可疑菌落生长，全部阴性，但胶体金免疫层析法检测结果同样为阴性，两者完全一致，符合率100%。参考文献[1]中华人民共和国卫生部疾病预防控制司,霍乱防治手册[M].第5版,北京:人民卫生出版社,1999.31-91.[2]《霍乱诊断标准-中华人民共和国卫生行业标准》WS289-2008，［S］，2008.[3]Mantri1 C K,Mohapatra1 S S,Ramamurthy T,et al.SeptaplexPCR assay for rapid identification of Vibrio cholerae includingdetection of virulence and int SXT genes[J].FEMS MicrobiolLett,2006,265:208－214.[4]杜昕颖，孙宏迪，王玉飞，等.O1群霍乱弧菌实时荧光定量PCR快速检测方法的建立.生物技术通讯，2010，21（5）：686-690.[5]柯雪梅，陈胤瑜，高璐璐，等.霍乱弧菌LAMP快速检测方法的建立及应用.南方医科大学学报，2009;29(10)：2059-2063.[6]李少彤,栾玉明,郭钜旋,等.胶体金法快速检测霍乱弧菌诊断试验的研究设计与分析[J].中国卫生检验杂志,2006,16(3):269-271.[7]张兰荣，严寒秋，甄博郡，等.快速法检测外环境水中霍乱弧菌结果的分析研究［J］.中国卫生检验杂志，2005，15（6）：711.