肺气虚证大鼠模型溶菌酶含量变化的实验研究药学论文.doc

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肺气虚证大鼠模型溶菌酶含量变化的实验研究_药学论文作者：官妍，程惠娟，王艳，汪长中，刘家园，涂俊才，姚姗姗【摘要】目的通过测定肺气虚证大鼠气管冲洗液、肺匀浆、血清中溶菌酶含量，为肺气虚证客观定量化诊断和深入研究肺气虚证本质提供依据。方法通过烟熏、铜绿假单胞菌感染，复制大鼠肺气虚证模型，分组检测其气管冲洗液、肺匀浆、血清中溶菌酶含量。结果模型组与对照组相比，气管冲洗液、肺匀浆中溶菌酶含量显著下降。结论肺气虚证大鼠，气管冲洗液、肺匀浆中溶菌酶含量变化可作为肺气虚证重要的客观指标之一。【关键词】肺气虚证溶菌酶气管冲洗液肺匀浆血清Abstract：ObjectiveTo determine lysozyme content in tracheal washes,pulmonary tissue and serum of rat model with lung"Qi"Deficiency syndrome,so to provide a basis for objective and quantitative diagnosis and further studies of the syndrome.MethodsThe rat model of Lung Qi Deficiency Syndrome was induced by smoking and Pseudomonas aeruginosa infection and the content of lysozyme in tracheal washes,pulmonary tissue and serum in all groups were examined.ResultsCompared with control group,the content of lysozyme in racheal washes,pulmonary tissue was decreased significantly.ConclusionThe change of lysozyme content in racheal washes,pulmonary tissue in the rat model can be used as an important and objective indicator of lung"Qi"deficiency syndrome.Key words：Lung"Qi"deficiency syndrome;Lysozyme;Tracheal washes；Pulmonary tissue homogenate;Serum肺气虚证是中医的一个常见证候，是以肺功能减退为主要特征的全身多系统功能衰退综合征。为探讨肺气虚证的本质，我们制作SD大鼠慢性支气管炎致肺气虚证模型，检测其气管清洗液、肺匀浆、血清等中溶菌酶含量的变化，旨在进一步为肺气虚证动物模型客观化、标准化评价及肺气虚证本质的研究提供实验依据。1材料健康SD大鼠50只,雌雄随机,6个月,体质量（200±10）g,由江苏省动物实验中心提供。实验动物生产许可证:SCXK(苏)20022-0002,合格证书:劳动(饲月龄)字95001。随机分为对照组10只，烟熏组10只，铜绿假单胞菌感染组30只（其中高剂量、中剂量、低剂量组各10只）。铜绿假单胞菌：临床分离株；通过染色镜检、生化反应验证。溶菌酶：Ultra Pure Grade Amresco NO.L8120溶壁微球菌：安徽中医学院微生物实验室保存菌株。2方法2.1动物模型的建立实验前一周，将大鼠置实验环境中喂养，室温18～22℃，自由进食、饮水。烟熏组采用文献［1］方法，将大鼠置入特制的1 m3的烟室中，以锯末50 g+10只合肥牌软三环（安徽合肥卷烟厂生产；焦油量13 mg，烟气一氧化碳量15 mg，烟气烟碱量1.1 mg）香烟混合点燃烟熏；每天烟熏30 min，自由进食、饮水，每天观察并记录其症状体征变化；49 d后停止烟熏，正常饲养51 d，完成造模。铜绿假单胞菌感染组，分别将铜绿假单胞菌高、中、低剂量（高剂量菌液浓度为6×109，中剂量为1.2×109，低剂量为2.4×108）菌液0.2 ml给大鼠滴鼻；此后，每间隔1天将大鼠放入水中游泳，待大鼠力竭时捞出；游泳3次休息1周，完成一次游泳循环；持续游泳循环，自由进食、饮水，每天观察并记录其症状体征变化，100 d完成造模。对照组则置于正常无烟环境中饲养100 d。2.2指标测定将大鼠用乙醚麻醉后，从腹主动脉取血，得血清；取气管浸入生理盐水（1 g/ml），得气管清洗液；取肺，用匀浆机处理后，得肺匀浆。按文献［2］中溶菌酶含量测定法测标本中溶菌酶含量。2.3数据处理实验数据用±s表示，各组间比较用t检验，数据统计采用SPSS11.0 for Windows软件处理。3结果3.1实验过程中动物表现的中医证候烟熏组、铜绿假单胞菌感染组的大鼠先后出现咳嗽、气急、精神萎靡、行动迟缓、消瘦便溏、毛发脱落等症状和体征。对照组则始终未见阳性症状。3.2肺气虚证大鼠模型溶菌酶含量变化结果见表1～3。表1大鼠气管冲洗液溶菌酶含量比较（略）表2大鼠肺匀浆溶菌酶含量比较（略）表3大鼠血清溶菌酶含量比较（略）4讨论烟熏组、铜绿假单胞菌感染组大鼠复制过程中的证候表现符合中医肺气虚证诊断标准，肺组织病理切片显示慢性支气管炎变化。大鼠气管冲洗液中溶菌酶含量变化可以看出，烟熏组、铜绿假单胞菌感染组与对照组相比，溶菌酶含量显著降低，证明无论是烟熏组还是铜绿假单胞菌感染组，均使大鼠出现了慢性支气管炎症状［2］，说明两组均使大鼠具备肺气虚证候，造模成功；而铜绿假单胞菌感染组与烟熏组相比，溶菌酶含量下降更为明显。大鼠气管肺匀浆中溶菌酶含量变化可以看出，烟熏组、铜绿假单胞菌感染组与对照组比较，溶菌酶含量也有显著下降；因此肺匀浆中溶菌酶含量也可作为肺气虚证判定的价值指标。大鼠血清中，烟熏组、铜绿假单胞菌感染组与对照组相比较，溶菌酶含量无显著差异。则测定血清中溶菌酶含量变化对判定肺气虚证无意义。溶菌酶含量可反映机体非特异性免疫机能的水平；溶菌酶含量下降，则机体局部抗菌、抗感染能力下降。痰中溶菌酶含量下降，临床提示为慢性支气管炎［2］。通过上述实验，我们发现肺气虚证模型组与对照组相比，气管冲洗液、肺匀浆中溶菌酶含量显著下降，证明测定大鼠气管冲洗液（或痰液）、肺匀浆中溶菌酶含量或可作为肺气虚证临床分度标准的依据之一。烟熏组与铜绿假单胞菌感染组比较，无论是在大鼠气管冲洗液还是在肺匀浆中，溶菌酶含量下降更为显著；提示适当浓度的细菌感染致大鼠肺气虚证，造模效果更优。【参考文献】［1］蔡圣荣，方志斌，黄开泉，等.肺气虚证大鼠血气分析及TNF-α、ET、MDA变化的实验研究［J］.中国中医基础医学杂志，2004，10（12）：32.［2］叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.中华人民共和国卫生部医政司，东南大学出版社，1997：365.