基于血管内皮聚集受体-1 rs12041331位点多态性进行武汉汉族人群阿司匹林抵抗易感基因研究阿司匹林为抗血小板治疗的常规治疗药物之一,然而,大约45%的患者服用阿司匹林后,仍继续经历或复发心血管事件,被称为“阿司匹林抵抗。研究发现血管内皮聚集受体-1rs12041331A位点携带者更易发生AR,PERA1rs12041331可能为AR的易感位点[1]。本文对武汉汉族人PEAR1rs12041331位点多态性进行分析,并比较不同性别、地区及种族之间的差异,以期为AR的遗传学药理学研究提供方向。一、材料、对象与方法1、材料试剂1×NH4Cl预处理液,PHARM-GENE01SNP分析保存液,耀金分基因分析检测试剂,均由北京华夏时代基因科技发展有限公司生产。仪器TL998A荧光检测仪,西安天隆科技有限公司产品。2、研究对象选择2016年1月至2016年6月来武汉市第一医院进行PEAR1rs12041331基因检测的849例汉族人群,其中男526例,女323例,年龄27～95岁。所有患者均签署知情同意书,且均符合祖籍3代及3代以上无血缘关系。3、用荧光染色原位杂交技术测定基因型[2,3]2-3]3.1乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中提取白细胞取全血200μL,分别加入1×NH4Cl预处理液1mL,充分混匀,静置于室温5min,每2～3min混匀1次,待液体颜色为橙清的红色。室温下以3300r·min-1离心5min,吸去上清,以1×NH4Cl小心洗涤沉淀,吸去上清,加入PHARM-GENE01SNP分析保存液30μL,涡旋震荡10s至混匀。3.2荧光检测仪上机检测取白细胞样本1.5μL,加入相应的基因分析检测试剂中,混匀,在荧光检测仪上运行相应程序完成检测。4、统计学处理用频数计数法统计等位基因及基因型频率,用χ2检验分析基因型频率是否符合Hardy-Weinberg遗传平衡(HWE),P>0.05为符合HWE;用SPSS22.0软件进行χ2检验,比较不同性别、地区、种族间等位基因及基因型频率差异。二、结果1、PEAR1rs12041331位点等位基因分布PEAR1rs12041331等位基因分布符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律(P>0.05),说明入组的中国汉族人群检测结果有群体代表性。2、不同性别人群PEAR1rs12041331位点等位基因、基因型分布比较849例入选人群中,PEAR1rs12041331位点等位基因及基因型分布频率,见表1。男性A等位基因及GA、AA基因型频率显著高于女性(P<0.05,P<0.05),见表1。3、不同地区人群PEAR1rs12041331位点等位基因、基因型频率分布比较结合既往研究,我们将武汉人等位基因及基因型分布频率分别与大连、新乡、青岛、广州人进行比较,武汉人A等位基因频率显著低于大连、广州(P<0.05,P<0.01),高于新乡(P<0.01);AA基因型频率显著低于大连、青岛、广州(P<0.05,P<0.01,P<0.05),高于新乡(P<0.01);GA基因型频率显著高于新乡、青岛(P<0.01,P<0.01),低于大连、广州(P<0.05,P<0.05),见表2。4、不同种族人群PEAR1rs12041331位点等位基因、基因型频率分布比较结合既往研究,我们将武汉人等位基因及基因型分布频率分别与美国白人、美国黑人进行比较,武汉人A等位基因频率显著高于美国白人、美国黑人(P<0.01,P<0.05);GA基因型频率显著高于美国白人、美国黑人(P<0.05,P<0.01);AA基因型频率高于美国白人(P<0.05),低于美国黑人(P<0.01),见表3。表1血管内皮聚集受体-1(PEAR1)rs12041331位点等位基因及基因型频率在不同性别中的分布(n,%)表2PEAR1rs12041331位点等位基因及基因型频率在不同地区中的分布(n,%)表3PEAR1rs12041331位点等位基因、基因型频率在不同种族间的分布(n,%)三、讨论PEAR1可以通过增强血小板糖蛋白功能,拮抗阿司匹林的抗血小板效应。美国GeneSTAR研究显示携带PEAR1rs12041331A位点的患者使用阿司匹林后更容易发生血小板聚集[9];我国学者XU等[10]发现汉族人PEAR1rs12041331AA纯合子携带者发生心血管不良事件的风险增加了3倍,因此,研究PEAR1rs12041331位点多态性分布有利于阐明该位点在阿司匹林个体化用药中的意义。本文比较了不同性别、地区和种族间PEAR1rs12041331位点等位基因及基因型分布差异,其中:男性A等位基因及AA基因型频率显著高于女性,提示男性患者可能更易发生AR;武汉地区A等位基因及AA基因型频率显著低于大连、广州,高于新乡,提示AR可能存在地区差异;汉族人AA基因频率显著高于美国白人、低于美国黑人,提示AR可能存在种族差异。参考文献:[2]梁欣,陈世财,夏彬彬,等.细胞色素P4502C19､PON1及ABCB1基因多态性与氯吡格雷抵抗的关联分析[J].中国临床药理学杂志,2017,33(7):585-588.[3]李六水,夏彬彬,夏瑞,等.卡马西平治疗相关基因的基因多态性在中国汉族健康受试者中的分布研究[J].中国临床药理学杂志,2018,34(10):1246-1249.[4]王向杰,许青宗,宋金玲,等.PEAR1基因多态性与冠心病PCI术后阿司匹林抵抗及预后的关系[J].中国临床研究,2018,31(3):308-312.[5]李建设,孟轲,赵剑婷,等.PEAR1基因多态性对长期服用阿司匹林脑梗死患者复发的影响[J].中国实用神经疾病杂志,2017,20(20):26-29.[6]卜庆乐.PEAR1基因多态性增加中国汉族人群缺血性脑卒中患者阿司匹林抵抗易感性[D].山东:青岛大学,2017.马良鹏,梅明,刘剑敏,蒋捷,胡磊,徐宏峰,黄鹤归.武汉汉族人群阿司匹林抵抗易感基因血管内皮聚集受体-1rs12041331位点多态性分析[J].中国临床药理学杂志,2020,36(08):947-949.基金:国家自然科学基金资助项目(81803646);湖北省自然科学基金资助项目(2018CFB326);武汉市卫计委指导基金资助项目(WX18Z33).
