影响K-B法药敏试验结果的因素医药卫生论文.doc

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影响K-B法药敏试验结果的因素_医药卫生论文[摘要]细菌的耐药性和抗生素的合理使用是全球广泛关注的问题.其中细菌对抗生素敏感试验（以下简称药敏试验）在延缓和控制细菌耐药性、合理使用抗生素方面发挥着重要作用，是临床合理用药的重要依据，为确保其结果的准确性，必须了解试验中培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等诸多因素的影响。

[关键词]细菌；药敏试验；琼脂；药片；室内质控细菌感染性疾病严重威胁人类的健康，抗生素的合理使用是治疗和控制此类疾病的有效手段，其中抗生素体外药物敏感试验（以下简称药敏试验）结果的正确与否对抗生素的选择至关重要，而药敏试验会受到诸多因素的影响，如培养基种类及质量、试验用药的纯度和菌液的浓度、药物的含量及孵育时间等。纸片法药敏试验是将抗菌药物吸收到特定的纸片中，然后置于已接种待测定菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌圈.抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC愈小。

本文就K-B纸片琼脂扩散法中的影响因素加以阐述，以提高药敏试验结果的准确性，为临床合理用药提供可靠依据。

1培养基对药敏试验的影响首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同，不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。WHO要求统一使用MuellerHinton（M-H）琼脂作为纸片法药敏试验的常规用培养基，该培养基中含有的低量胸腺嘧啶或胸腺嘧啶核苷是与磺胺类药物和甲氧苄啶竞争的物质，若过量可能会逆转磺胺类和甲氧苄啶的抑菌效应，使得抑菌圈变小变模糊，甚至消失，从而导致假耐药报告。培养基中还有适量的钙，镁离子，在培养基中起到溶酶的作用，其含量的变化，可影响氨基糖苷类和四环素对铜绿假单胞菌的试验结果，含量过高，抑菌圈会变小，含量过低，抑菌圈会大得不可接受。

一般细菌，如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂；做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板；链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次，倾注平板时，厚度应合适（约5-6mm），不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸（PABA）能拮抗磺胺药和TMP的活性。

2药敏纸片质量的影响2.1药敏纸片的药量和pH值：用半饱和法制作的药敏纸片含药量一般为10μg，饱和法药敏纸片含药量为20μg。药敏纸片的pH值一般要求为中性，这样适合药物的活度。

2.2药敏纸片的规格：药敏纸片的厚度要求在1mm左右，这样适合药物的扩散速度和细菌的生长。药敏纸片的直径为6.00~6.35mm。无论药敏纸片的厚度过厚、过薄或者直径过大、过小，均会影响药敏试验的结果。

2.3药敏纸片的保存及片间差：药敏纸片的质量是做好药敏试验的关键。有的药敏纸片刚购买来抑菌圈就偏大或偏小，纸片之间存在着较大的片间差。因此，药敏纸片在用前必须检验其片间差和准确度，只有达到标准后方可使用。同时，药敏纸片应注意保存，常规用量之外的药敏纸片最好放于-20℃保存不超过一年。纸片保存应用过程中有些纸片对光不稳定，如喹诺酮类药物，应注意避光保存。青霉素类、含有β-内酰胺抑制剂和亚胺培南的纸片受潮湿后易降低其药物的活性，应加入干燥剂保存。盛药敏纸片的小瓶从低温保存处取出后，应在室温平衡至少10min后再打开，避免冷凝水影响药效。

2.4药敏纸片应用标准菌株定期检测是否失效：监测时是根据所形成的抑菌圈大小是否发生变化来判定的，若抑菌圈减小，可能是抗生素降解所致，应注意更换新的药敏纸片。另外，有些纸片并不经常使用，特别对规模较小的实验室来讲，应注意纸片的使用期限，不要使用过期的药敏纸片。

3细菌接种量从孵育18～24h的血平板培养物中，挑取4～5个菌落，制成0.5麦氏浊度的菌悬液。用棉拭子沾取菌悬液在M－H平板上依3个方向（转60°）涂划，以保证接种物均匀分布。细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

4药物浓度药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量的配置。

5孵育条件，温度和时间药敏试验中培养时间的长短、温度的高低等都是影响药敏试验结果的因素。接种菌液后，待琼脂表面水分稍干后，即按要求贴上含药纸片，15min内放入35℃孵箱孵育（检测肺炎链球菌、嗜血杆菌及淋病奈瑟菌敏感性的平板应放在5％～7％二氧化碳孵箱中孵育），平板最好单独摆放，重叠最多不能超过2个。孵育18～24h，读取结果。有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好药敏纸片的培养基先置4℃冰箱内2-4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较明显的抑菌圈。

6药敏试验质控要求（1）用质控菌株按标准方法与临床标本分离菌株同步进行药敏试验。

（2）更换药物或培养基时必须用相应质控菌株测试。

（3）三级医院每天用质控菌株进行常规监控，二级医院每周监测1次。每次测试结果应作记录。

（4）如出现抑菌环直径超出可接受范围，应从培养基、抗菌药物、接种浓度等方面寻找原因，并及时纠正。

7药敏试验存在的问题当前进行药敏试验仍然存在一些问题，主要包括以下几方面：7.1方法学不统一，没有标准化。

7.2市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质控，质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。

7.3因需要先进行细菌的分离培养，所以药敏试验报告出结果时间长，检验与临床缺乏沟通，对于基层兽医站或养殖场，药敏结果不能满足临床治疗要求，容易延误治疗时机。

7.4对于部分营养需求较高的细菌或微生物，如链球菌和支原体，临床上较难培养，限制了药敏试验的应用。

总之，临床中纸片法药敏试验结果受到多种因素的影响，在没有标准和严格操作规程的情况下，抑菌环的大小不能明确体现出一个细菌对药物的敏感度的高低，更不能通过纸片法药敏试验结果判断细菌对不同药物的敏感性的高低。一种药物抑菌环的有无或大小只能判断出该药对细菌有没有效果，敏感性的高低只能通过科学、严格的实验来确定。

参考文献：[1]李影林.临床微生物学及检验.北京：人民卫生出版社，1995：75-117.

[2]国家药典委员会编.中华人民共和国药典.2005年版.北京：化学工业出版社，2005，1.

[3]杨文杰，陶家驹，张宾.中国全科医学，2001，10.