细辛、辛夷挥发油β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响_药学论文作者：马容狄留庆毕肖林祖强【摘要】：目的研究穴贴定喘膏中细辛和辛夷挥发油的β-环糊精和HP-β-环糊精包合物的制备及其对透皮吸收的影响。方法挥发油分别用β-环糊精和HP-β-环糊精包合,采用Franz扩散装置,运用气相色谱法测定挥发油成分,考察β-环糊精和HP-β-环糊精包合对透皮吸收的影响。结果β-环糊精包合物的累积透过率优于HP-β-环糊精包合物。结论挥发油用β-环糊精包合可促进透皮吸收。【关键词】细辛辛夷挥发油β-环糊精HP-β-环糊精透皮吸收Abstract：Objective To study the preparation of volatile oils obtained from asarum and lily magnolia complexed withβ-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin in Xuetie Dingchuan plaster,and to study its impacts of transdermal absorption.Methods The volatile oil was complexed withβ-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin.GC method was used in the determination of volatile oils complexed withβ-cyclodextrin and hydroxypropyl-β-cyclodextrin to investigate the impacts of transdermal absorption.Results The accumulation transmission of the volatile oils complexed withβ-cyclodextrin was superior to that with hydroxypropyl-β-cyclodextrin.Conclusion The inclusion of volatile oils withβ-cyclodextrin can enhance drug penetration via skin.Key words：asarum；lily magnolia；volatile oils；β-cyclodextrin；hydroxypropyl-β-cyclodextrin；transdermal absorption细辛、辛夷是穴贴定喘膏中的主要组成中药,该制剂具有逐饮豁痰、利气平喘的功效,临床常用于治疗支气管哮喘和喘息性支气管炎。β-环糊精(β-CD)和HP-β-环糊精(HP-β-CD)包合都能够稳定芳香挥发性成分,本试验将穴贴定喘膏中芳香挥发性成分(细辛、辛夷挥发油)分别经β-CD和HP-β-CD包合,再通过体外透皮扩散试验,研究包合对体外经皮扩散的影响。1试验材料1.1仪器HP-4890D型气相色谱仪(中国惠普有限公司)；WDL-95色谱工作站(中国科学院大连化学物理研究所)；GA2000A低噪音空气泵(北京中兴汇利科技发展有限公司)；GH-500B氢气发生器(北京中兴汇利科技发展有限公司)；FA-1104型电子天平(上海天平仪器厂)；TP-5型智能透皮扩散仪；磁力搅拌器(上海实验仪器厂)；数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)。1.2动物健康SD大鼠,体重180～220 g,南京中医药大学实验动物中心提供。1.3试剂及药材β-CD(国药集团化学试剂有限公司)；HP-β-CD(泰兴市一鸣精细化工有限公司)；细辛、辛夷药材(购于安徽,由南京中医药大学中药鉴定教研室吴德康教授鉴定)。所用试剂均为分析纯。2方法与结果2.1挥发油空白回收率的测定取细辛、辛夷混合挥发油(1∶1)2 mL,置圆底烧瓶中,加蒸馏水150 mL及少许沸石,蒸馏5 h,用挥发油提取器提取挥发油,待冷却30 min后,测定挥发油体积,根据空白回收率＝(回收的挥发油体积/加入的挥发油体积)×100%计算。结果表明,挥发油的空白回收率为90.3%。2.2挥发油β-环糊精包合物的制备参考文献[1-2],按照混合挥发油与β-CD为1∶1、1∶2、1∶4的比例,称取β-CD适量,加2倍量蒸馏水置研钵中研匀,取混合挥发油1.0 mL少量分次加入研钵,在40℃下研磨1 h,研磨混合物50℃真空干燥,包合物用无水乙醇洗涤,除去表面残留的挥发油,挥去乙醇,得β-CD包合物。2.3挥发油HP-β-环糊精包合物的制备按照混合挥发油与HP-β-CD为1∶1、1∶2、1∶4的比例,称取HP-β-CD适量,加2倍量蒸馏水置研钵中研匀,制法同β-CD包合物。2.4挥发油包结率的测定取所制备的包合物置圆底烧瓶中,加入蒸馏水150 mL及少许沸石,蒸馏5 h,用挥发油提取器提取挥发油,待冷却30 min后测定挥发油体积,按下式计算挥发油包结率。结果见表1。表1挥发油包结率测定结果(略)挥发油包结率(%)＝回收的挥发油体积×100加入的挥发油体积×空白回收率试验结果表明,以1∶4进行包合时,包结率已基本达到所需要求,当进一步增加辅料的比例时,包结率未见显著增大,所以我们以1∶4进行包合。2.5透皮扩散试验2.5.1透皮前供试品的制备考虑到β-CD包合物(1∶4包合)包结率约为HP-β-CD包合物(1∶4包合)的2倍,为保证供试品所含挥发油量平行,称取β-CD包合物2 g,HP-β-CD包合物4 g,置于锥形瓶中,用40%乙醇超声提取30 min,提取液滤过,用旋转蒸发仪浓缩,定容于5 mL容量瓶中。各吸取上述溶液1 mL于25 mL容量瓶中,40%乙醇定容,滤过,平行3份,供气相色谱检测用。2.5.2体外透皮扩散试验取大鼠3只,脱毛膏脱毛,恢复24 h后处死,剥离腹部皮肤,刮去脂肪组织,置于生理盐水中备用。试验时取出,平展于TP-5型智能透皮扩散仪装置中,固定。称取β-CD包合物(1∶4包结)2 g,HP-β-CD包合物(1∶4包结)4 g,分别置于鼠皮上,固定好装置(β-CD和HP-β-CD包合物各平行3份)。下层接受液为22 mL 40%乙醇溶液,磁力搅拌器恒速搅拌(300 r/min),整个装置放于37℃恒温水浴中。药物从给药室经皮渗透到接受室,于1、2、3、4、6、8、12、24 h各取接受液1 mL,并向装置中补充1 mL新鲜的接受液,得到不同时间点皮肤透过液。2.5.3气相色谱法测定不同时间接受液中挥发油的含量色谱柱：HP-50+(Crosslinked 50%PH M E Siloxane),0.53 mm×30 m；柱温采用程序升温,初始温度145℃,维持2.5 min,以15℃/min的速率升至190℃,恒温6 min；载气为高纯氮气,柱前压5 psi；检测器：FID,260℃；进样口温度：260℃。取透皮前供试品以及各时间点的皮肤透过液,每个样品进样2次,每次进样1μL。色谱图见图1。结果色谱图中在t＝6.5 min的位置的峰,面积较大,且峰形较好,故选择此峰作为考察的依据。根据t＝6.5 min峰的面积,计算各时间点累计释放百分率,结果见表2。表2不同包合物对其累积透过率的影响(略)从表2可以看出,β-CD包合物(1∶4包结)和HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率相差很大,二者经Paired Samples T test检验,有显著性差异(P＝0.003)。这表明：β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率优于HP-β-CD包合物(1∶4包结)的累积透过率。故我们在工艺中以β-CD代替HP-β-CD对挥发油进行包合。虽能取得一定的临床疗效,但却会出现相应的不良反应。笔者根据“肾藏精”、“主生殖”、“精血同源”、“精血互生”等理论,认为AsAb阳性导致的男性不育,其病机主要是肾虚、气血失和。肾虚精亏,气不化精,精不化血,血行无力,而形成肾虚血瘀。治疗当以补肾活血化瘀为法。方药以淫羊藿、蛇床子温肾壮阳为君药。熟地黄、紫河车、女贞子补肾益精、阴中求阳；山茱萸、枸杞子、菟丝子补肝肾；山药补肺脾肾之气而达全身；当归、桃仁活血祛瘀、通行血脉；五味子益气生津、补肾宁心,共为臣药。佐以茯苓、牡丹皮渗湿泄热；甘草解毒、调和诸药。现代药理研究表明,活血化瘀方药能通过增强血-睾屏障的功能,增加精浆免疫抑制因子的产生及提高精子内各种酶的活力,调整机体免疫机制与内在平衡,从而消除抗精子抗体或降低其活性,以治疗免疫性不育。【参考文献】[1]Madar J,Urbanek V,Chaloupkova A,et al.Role of sperm antibodies and cellular autoimmunity to sperm in the pathogenesis of male infertility[J].Ceska Gynekol,2002,67(1)：3.[2]何继永.外科疾病诊断标准[M].北京：科学出版社,2001.543.[3]中华人民共和国卫生部.中药新药临床研究指导原则[S].1993.192.[4]Dinitrora OK,Kalaidzhiewv SK,Nakov LS,et al.Methods for the detection of anti-sperm antibodies associated with immunologically-mediated human infertility[J].A kush Ginekol(Sofiia),2002,41(3)：43.
