术后腹腔粘连动物模型制作的实验研究医学论文.doc

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术后腹腔粘连动物模型制作的实验研究_医学论文作者：王俊杰王刚雷正王保蒋华军叶方李炯【摘要】目的研究术后腹腔粘连大鼠模型的制作及运用。方法用锉刀与干纱布、血管钳、刀片在大鼠蚓突造模,进行大鼠腹腔粘连模型制作的优选。将32只模型SD雄性大鼠随机分为A组(纱布组)、B组(血管钳组)、C组(锉刀组)、D组(刀片组)，每组8只，饲养6d，第7天处死，采用Phillips五级评分法对腹腔粘连进行统计分析。结果A，B两组造模效果均为Phillips五级评分标准的Ⅰ级，C组为Ⅳ级,D组为Ⅲ级，C组与A，B，D组之间两两比较均有显著性差异(P<0.05)。B组病死率为10%，D组达20%，经统计学处理4组间无明显差异(P=0.276 4)。结论以大鼠的蚓突制作术后病理性腹腔粘连动物模型，锉刀为最佳造模工具，其优点是造模均匀，均达Ⅳ级。【关键词】腹腔粘连；大鼠；模型；锉刀法Abstract：ObjectiveTo set up an animal model of intraabdominal adhesion after surgery.MethodsA new rat model of intraabdominal adhesion was made by using pincers,dry gauze,hemostatic clamps and razor blade.Rat appendix was used to produce intestinal adhesions.Thirty two male Sprague-Dawley rats were divided into 4 groups:group A(gauze group),group B(hemostatic clamp group),group C(p incer group),group D(razor blade group),8 rats in each group.Animals were fed for 6 days before killed.The extent of adhesion was evaluated by Phillips scale and analyzed statistically.ResultsThe extents of adhesion in group A and B were gradeⅠby Phillips scale,grade IV in group C,gradeⅢin group D.The extent of adhesion in group C was different significantly from group A,B,and D(P<0.05).The death rate in group B was 10%and 20%in group D,which were not different statistically(P=0.2764).ConclusionThe best way to make a rat model of intra-abdominal adhesion is by using rat appendix and rubbed with a pincer,which has the benefit of generalized distribution and extent to grade IV.Key words：Abdominal cavity’s adhesion;Rats;Model;File笔者在进行通腑理气方防治腹腔粘连作用机制实验研究时发现，术后病理性腹腔粘连动物模型至今尚无金标准［1］，常见的造模方法较多［2］，可选用的造模工具有刀片、纱布、血管钳等，造模部位可选择升结肠、蚓突、小肠、胃等；动物可选用犬、兔、大鼠、小鼠等。本实验采用SD雄性大鼠，在大鼠蚓突，用锉刀与常用的干纱布［3］、血管钳［4］、刀片［5］进行大鼠腹腔粘连模型制作的优选，通过术后7 d大鼠造模Phillips［6］五级评分及病死率的统计，分析这4种造模的区别，探讨术后病理性腹腔粘连大鼠模型的制作及运用。1材料1.1动物220～270g 4周龄清洁级SD雄性大鼠。购自华中科技大学同济医学院实验动物中心，许可证号：CYX(鄂)2005-02。1.2工具什锦锉由江阴市盛达金刚制品厂生产，规格为3 mm×140 mm/10支；干纱布规格为40 mm×50 mm，高压灭菌，恒温箱37℃干燥；其他工具包括血管钳、剪刀、持针器、0号无菌丝线等。2方法2.1动物分组及造模方法动物采用随机分组：A组(纱布组)、B组(血管钳组)、C组(锉刀组)、D组(刀片组)，每组10只。各组动物均禁食12 h后，用10%水合氯醛(250 mg/kg)腹腔注射麻醉；动物麻醉后仰卧位固定，消毒后，无菌操作下取前正中切口1.5 cm进腹。各组造模方法：A组回盲部右侧面用纱布反复摩擦浆膜层至表面出现针尖状出血点，形成约5 cm×4 cm的受损创面后纳入腹腔；B组用有齿血管钳每隔0.5 cm间距夹伤回盲部浆膜层，持续时间3 s，以局部出现针尖状出血点为度，持续夹5处后纳入腹腔；C组在回盲部右侧面用什锦锉刀反复摩擦浆膜层至表面出现针尖状出血点，形成约5 cm×4 cm的受损创面后纳入腹腔；D组在回盲部右侧面用刀片反复括擦浆膜层至表面出现针尖状出血点，形成约5 cm×4 cm的受损创面后纳入腹腔，各组均逐层关腹。2.2评分连续观察7 d，各组存活大鼠于术后第8天采用颈椎脱臼法处死动物，剑突下“S”型切口进腹，由1名未参与研究者根据Phillip s五分级标准(表1)、观察腹膜粘连情况，分别记录得分。2.3统计学方法统计采用SPSS 12.0，各组之间比较用Kruskal-Wallis检验，两组间差别用LSD两两比较检验，检验水准均设为α=0.05。表1大鼠Phillips五级分类法及评分标准3结果3.1一般情况术后24 h，各组动物一般状态均差，不活动，进少量水和食物；2 d后各组一般状态尚可,活动较以前增加，饮水和进食已基本接近正常；术后3 d后各组动物一般状态、活动、饮水和进食已基本正常。大鼠切口愈合均良好，无一例发生切口疝；大鼠的病死率为7.5%(3/40,B组1只,D组2只)，大鼠死亡的可能原因为肠瘀血坏死、出血、蚓突穿孔导致腹膜炎、绞窄性肠梗阻。各组大鼠病死率无统计学意义(χ2=3.864 9，P=0.276 4)。3.2大鼠腹腔粘连评价结果各组经SASKruskal2Wallis检验提示4组间差异有统计学意义(χ2=14.92，P<0.000 1)。各平均等级的中位数：A，B两组造模效果均为Phillips五级评分标准的Ⅰ级；C组达Ⅳ级，D组达Ⅲ级。经LSD比较结果提示，A组与B组之间两两比较无显著性差异(F=1.30，P=0.261 9)；C组与A，B，D组之间两两比较均有显著性差异(F=38.68，P<0.000 1；F=24.13，P<0.000 1；F=6.25，P=0.017 6);D组与A、B组之间两两比较有显著性差异(F=11.32，P=0.002 0；F=4.86，P=0.034 5)。见表2。4讨论以大鼠的蚓突制作术后病理性腹腔粘连动物模型,4组造模结果经统计学处理提示有显著差异,其中锉刀组(C组)效果最好,刀片组(D组)效果其次,纱布组与血管钳组效果最差,4组造模效果排序为C>D>A=B。纱布与血管钳造模效果均为Phillips五级评分标准的Ⅰ级；锉刀造模效果达Ⅳ级，刀片组造模效果达Ⅲ级。纱布与血管钳不适合用于造模，易造成药物疗效假阳性的严重结果，干扰实验结果的真实性；刀片组造模效果良好,能达Ⅲ级标准，但病死率较高，易造成药物不良反应的假象，但基本可用于判断药物的疗效，但要考虑其死亡损失的样本数量，在作实验时应适当增加样本例数。锉刀造模效果最好，造模均匀，平均达Ⅳ级标准，病死率为0。表2大鼠术后腹膜粘连评分Wilcoxon秩和检验结果锉刀最适合在大鼠的蚓突制作术后病理性腹腔粘连模型，分析其优点有：①均匀程度:什锦锉为一钢性平面，接触的蚓突面虽不平整，但可用手指在蚓突背面顶住，故使摩面均匀；而干纱布为一柔性平面，虽可随着接触不平的蚓突面而自行调整，但摩擦力度却不均匀。血管钳钳夹之间存在间隔，而刀片摩擦面之间同样存在间隔,故这两种造模方法都存在创伤面不均匀的问题。②定性指标：通过以上实验可以看出，回盲部右侧面用锉刀反复磨擦浆膜层至表面出现针尖状出血点，形成约5 cm×4 cm的受损创面，为一非常客观的定性指标。选择大鼠作为术后病理性腹腔粘连动物模型，以锉刀造模为较好的工具。造模操作以1～3人为好，每人分工明确(切开腹腔1人、造模1人，关腹1人或切开腹腔1人、造模及缝合1人)，这样可使标准相对较固定，排除一些人为干扰因素，为实验的成功打下良好的基础。【参考文献】［1］曾莉,俞晶华,翟亚春,等.活血通腑方对大鼠术后血FIB及FDP水平的影响［J］.中国全科医学杂志,2004,7(22):1655.［2］杨雁灵,徐小平,李开宗,等.乌司他丁和白细胞介素1β抗体预防术后腹膜粘连的实验研究［J］.医学研究生学报,2004,17(3):222.［3］王春荣,张青山,贾宗良,等.肠功能恢复汤与东菱克栓酶预防术后肠粘连的实验研究［J］.中国中西医结合外科杂志,1998,4(6):340.［4］金文波,冒国光,刘东华,等.高压氧对实验性腹膜粘连的防治作用［J］.中华航海医学杂志,1998,5(4):218.［5］杨西晓,曾煦欣,侯连兵.常通口服液对手术所致肠粘连大鼠肠壁转化生长因子表达的影响［J］.中国药房,2004,15(4):206.［6］Phillip s RK,Dudley HA.The effect of tetracycline lavage and trauma on visceral and parietal peritoneal ultrastructure and adhesion formation［J］.Br J Surg,1984,71(7):537.