子宫内膜癌组织P27蛋白的表达及其临床意义临床医学论文.doc

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子宫内膜癌组织P27蛋白的表达及其临床意义_临床医学论文［摘要］目的探讨子宫内膜癌中P27蛋白的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法检测42例子宫内膜癌中P27蛋白的表达，并与正常子宫内膜和增生内膜进行了对比。结果子宫内膜癌中P27蛋白胞核高表达率为21.4%，明显低于正常子宫内膜和增生子宫内膜，差异有显著性（χ2=5.470、12.306，P<0.05）;P27蛋白胞核表达与组织学分级有关，分化差者P27蛋白胞核表达率低（χ2=12.715，P<0.01）;内膜癌中P27蛋白胞浆表达阳性率为47.6%，明显高于正常子宫内膜和增生内膜（H=57.656，P<0.01）。结论P27蛋白胞核表达缺失与子宫内膜癌的发生发展及恶性程度的增高有关;P27蛋白胞核定位缺失与其功能丧失有关。［关键词］P27蛋白质;子宫内膜肿瘤;免疫组织化学［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the expression of P27 protein in endometrial carcinoma and its clinical significance.MethodsThe expression of p27 protein was detected in 42 cases of endometrial carcinoma with immunohistochemical technique，and compared with that in normal endometrium and hyperplastic endometrium.ResultsThe high nuclear expression rate of P27 protein in endometrial carcinoma was 21.4%，significantly lower than that in the normal endometrium and hyperplastic endometri-um（χ2=5.470，12.306;P<0.05）.Nuclear expression of P27 protein was related with cell differentiation and it was low in moder-ately and poorly differentiated cells（χ2=12.715，P<0.01）.The cytoplasmic stain of P27 in endometrial tumor cells was 47.6%，which was significantly higher than that in normal endometrium and hyperplasia endometrium（H=57.656，P<0.01）.Conclu-sionThe deletion of nuclear expression of P27 is related to the genesis and development of endometrial cancer and its increased ma-lignancy.The loss of nuclear localization of P27 protein is associated with inactivity of the protein.［KEY WORDS］P27 protein;endometrial neoplasms;immunohistochemistry细胞分裂周期的精确性和定时性为细胞正常生长和分化所必需，细胞周期调控失常可能导致恶性肿瘤的发生和发展。p27是细胞周期G1期的重要负调控因子，其表达异常与某些恶性肿瘤的发生有关［1］。本研究应用免疫组化方法检测了子宫内膜癌（EC）中P27蛋白的表达，以探讨其在EC发生、发展中的作用。1材料与方法1.1标本及其来源收集青岛大学医学院第二附属医院2002年6月～2004年12月存档EC病人蜡块标本42例，均经100 g/L甲醛固定、石蜡包埋。按国际妇科病理协会（ISGP）1988年标准进行病理分类，且将腺鳞癌单独列出。临床手术分期按FIGO 1989年标准:Ⅰ期28例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期2例。组织学分级按FIGO 1988年标准:G115例，G215例，G312例。另取同期因子宫内膜增生或子宫肌瘤行子宫切除术的子宫内膜存档蜡块，其中21例为增生内膜，16例为正常内膜（对照组）。增生内膜分类按ISGP 1987年标准:单纯增生7例，复合增生5例，不典型增生9例。所有病例术前均未接受过放疗及化疗。3组间年龄差异无显著性（P>0.05）。1.2免疫组化染色方法一抗为鼠抗人P27蛋白单克隆抗体工作液，购自北京中山生物制品有限公司。微波修复抗原，DAB显色。P27蛋白表达阳性对照按试剂盒要求选用扁桃体组织，阴性对照以磷酸缓冲液代替一抗。1.3结果判断参照文献［2］的标准，P27蛋白阳性细胞着色位于核内，呈棕黄色颗粒。未见阳性细胞为阴性（-），阳性细胞<5%（+）及阳性细胞5%～50%（）为低表达，阳性细胞>50%（）为高表达。在血管内皮细胞中亦可见P27蛋白核阳性染色，将其作为P27染色内对照。P27蛋白亦出现胞浆着色，根据阳性细胞百分率及显色深浅分级:①阳性细胞百分率:无细胞显色为0，<25%为1，25%～50%为2，>50%为3;②显色深浅:无显色为0，浅黄色为1，棕黄色为2，棕褐色为3。二项乘积:0～1分为（-），2～3分为（+），4～5分为（），>5分为（）。1.4统计学处理所有资料均用SPSS10.0统计软件进行分析，组间表达比较采用χ2检验及H检验。2结果2.1P27蛋白的核表达42例EC中P27蛋白胞核高表达率为16.7%，较正常内膜62.5%及增生内膜46.4%明显降低，差异有显著性（χ2=5.470、12.306，P<0.05）。见表1。中、低分化组P27蛋白胞核高表达率为3.7%，明显低于高分化组40.0%，差异有显著意义（χ2=12.715，P<0.01），而中分化与低分化组比较差异无显著性（χ2=1.298，P>0.05）。P27蛋白胞核高表达率与年龄、组织类型、手术病理分期、肌层浸润、淋巴转移均无相关性。见表2。表1 P27蛋白胞核表达情况（略）与其他两组比较，*χ2=5.470、12.306，P<0.05表2 EC中P27蛋白胞核表达与临床特征间的关系（略）2.2P27蛋白的胞浆表达EC中P27蛋白胞浆表达阳性率为47.6%，较正常内膜、增生内膜明显增高，差异有显著性（H=57.656，P<0.01）。见表3。表3 P27蛋白胞浆表达（略）3讨论哺乳动物细胞增生及分化的调节大部分发生于细胞周期G1/S期的转变时期［3］。P27蛋白是1994年发现的相对分子质量为27 000的热稳定蛋白质［4］，是高度保守的进化分子，其主要作用是通过抑制G1期细胞周期蛋白激酶CDK2、CDK4等的活性而发挥负调控作用，使细胞周期停滞于G1期［5］，在细胞进入S期前有时间修复损伤的DNA，并做好染色体复制前的必要准备。KAWAMATA等［6］研究表明，p27基因异常在人类各种肿瘤的发生中非常罕见，p27主要通过其蛋白水平改变而非基因突变调节其在肿瘤的作用，因此被称为候选的抑癌基因。本文研究结果显示，P27蛋白在EC中表达较正常子宫内膜降低，说明p27参与EC细胞的生长调节，其表达降低有利于EC细胞的快速增殖，从而与EC的发展有关。在部分有肌层浸润的EC切片中，可见浸润到肌层的癌细胞中P27蛋白核表达较少，在靠近病灶中心部位，P27蛋白核表达较周边部位增强，与JORDAN等［7］在口腔鳞癌中观察到P27蛋白的表达模式近似，说明EC细胞的浸润生长与P27蛋白的作用消失有关。另外，本文不典型增生子宫内膜组P27蛋白核高表达率为22.2%，较正常内膜（62.5%）明显降低，但差异无统计学意义，可能与不典型增生组的样本较少有关。P27蛋白在不典型增生内膜中的表达呈降低趋势表明，不典型增生内膜中可能已存在p27对细胞增生控制作用的降低，使细胞增殖加快，来不及修复可能出现的异常细胞，以致转化为恶性细胞的机会增多，因此，P27蛋白表达降低可能与EC的发生有关。本文结果显示，EC中、低分化组的P27蛋白的核高表达率明显低于高分化组，说明P27蛋白的高表达有利于EC细胞的分化成熟，有利于癌细胞恶性程度的降低，因此，P27蛋白核表达的下降可成为预示EC恶性程度增高的有用指标。这与P27蛋白在多种消化道肿瘤及肝癌中存在着表达降低，并可作为一种不良预后指标的报道相似［8］。本研究中EC的P27蛋白核表达在不同手术病理分期、肌层浸润及淋巴结转移间差异均无显著性，但从高表达率上看，Ⅰ期病例高于Ⅱ～Ⅳ期病例，浅肌层浸润高于深肌层浸润，无淋巴结转移组高于有转移组，提示P27蛋白核表达缺失可能有利于EC的发展，其差异无统计学意义可能与样本较少有关。P27蛋白是一种核蛋白，其C端存在一个核定位序列［9］，去除该序列的P27蛋白散在于胞浆中，无法发挥其细胞周期抑制作用。本文研究结果显示，P27蛋白存在胞浆表达，EC中P27蛋白胞浆表达阳性率较对照组明显增高。P27蛋白在正常内膜多为核表达而在EC中胞浆表达增多，说明P27蛋白的核定位与其功能的发挥密切相关。P27蛋白与核内的靶物质相互作用而发挥其抑制细胞增生等作用，胞浆异位使其与相关的靶物质分离而失活。文献研究报道p27基因可以诱导凋亡，动物试验亦发现p27具有抑制肿瘤生长的作用［9］。本文研究结果显示，子宫内膜癌中存在着P27蛋白低表达及核定位缺失，可为子宫内膜癌的p27基因疗法提供理论基础。［参考文献］［1］TAN P，CADY B，WANNES M，et al.The cell cycle inhibi-tor p27kip1 is an independent prognostic marker in small（T1a，b）invasive breast carcinomas［J］.Cancer Res，1997，57:1259.［2］SKOMEDAL H，KRISTENSEN G B，LIE S K，et al.Aber-rant expression of the cell cycle associated proteins TP53，MDM2，p21，p27，cdk4，cyclinD1，RB，and EGRF in cervical carcinomas［J］.Gynecol Oncol，1999，73:223.［3］ORTEGA S，MALUMBRES M.Cell cycle and cancer，the re-striction point and the G1/S transition［J］.Current Genomics，2002，3（4）:245.［4］TOYOSHIMA H，HUNTER T.p27，a novel inhibitor of G 1Cyclin-CDK protein kinase activity，is related to P21［J］.Cell，1994，78（15）:67.［5］DESDOUETS C，BRECHOT C.p27:a pleiotropic regulator of cellular phenotype and a target for cell cycle dysregulation in cancer［J］.Pathol Biol（Paris），2000，48（3）:203.［6］KAWAMATA N，MOROSETTI R，MILLER C W，et al.Molecular analysis of the cyclin-dependent kinase inhibitor gene p27/kip1 in human malignancies［J］.Cancer Res，1995，55:2266.［7］JORDAN R C K，BRADLEY G，SLINGERLAND J，et al.Reduced level of the cyclin-dependent kinase inhibitor p27kip1 in epithelial dysplasia and carcinoma of the oral cavity［J］.Am J Pathol，1998，152:585.［8］CHETTY R.p27 Protein and cancers of the gastrointestinal tract and liver:an overview.［J］.Clin Gastroenterol，2003，37（1）:23.［9］HIRANO K，ZENG Y，HIRANO M，et al.Sequence require-ment for nuclear localization and growth inhibition of p27kip1R，a degradation-resistant isoform of p27kip1［J］.Cell Biochem，2003，89（1）:191.