艾叶油的平喘作用研究――小鼠卵蛋白复制法.docx

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艾叶油的平喘作用研究――小鼠卵蛋白复制法作者：魏国会，杜梅素，宋宁，岳春景【摘要】目的研究艾叶油的平喘活性。方法采用经卵蛋白致敏的哮喘小鼠气道炎症模型研究艾叶油的平喘作用，考察了艾叶油对支气管肺泡灌洗液(BALF)的影响。结果艾叶油高剂量组对卵蛋白引起的小鼠哮喘，能明显减少BALF中白细胞总数（P<0.05）和嗜酸性粒细胞（Eosinophil，Eos）计数（P<0.01）。结论艾叶油具有平喘作用。【关键词】艾叶油；卵白蛋白；支气管肺泡灌洗液艾叶Artemisia argyi Levl.et Vant为菊科植物艾的干燥叶，有平喘镇咳、祛痰、抗过敏、止血、抗凝血、护肝利胆、解热镇静、抑制心脏收缩及降压等作用，为临床常用中药材。艾叶作为我国历史悠久的常用中药，千百年来一直受到人们的关注，在《名医别录》与《本草纲目》等书中对其都有记载［1～3］。气道炎症是近年来哮喘发病机制研究领域的重要进展。支气管哮喘患者的气道炎症是由多种细胞特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞参与，并有五十多种炎症介质和25种以上的细胞因子相互作用的一种气道慢性非特异性炎症。本研究通过建立稳定的小鼠哮喘模型［4～7］，观察艾叶油对支气管肺泡灌洗液(BALF)的影响，旨在明确其对哮喘气道炎症的抑制作用。1仪器与材料1.1仪器Anke NKE-40B型离心机(上海安亨科学仪器厂)；血球计数板（上海市求精生化试剂仪器有限公司）；光学显微镜。1.2动物雄性Balb/c小鼠（清洁级），体质量18～22 g，年龄6～8周，由河北省实验动物中心提供。1.3试剂与试药卵白蛋白（OVA），国药集团化学试剂有限公司产品，批号F20070722；地塞米松片，濮阳市汇元药业有限公司产品，批号061205。瑞氏染色缓冲液；艾叶油自制(取艾叶500 g，用水蒸气蒸馏法，提取挥发油，即得)；磷酸盐缓冲液PBS（pH 7.4）：取NaCl 8.0 g,KH2PO4 0.2 g，Na2HPO4・12 H20 2.9 g，KCl 0.2 g，蒸馏水溶解，于1 000 ml容量瓶中定容，4℃保存。2方法2.1小鼠卵蛋白复制法Balb/c小鼠随机分组，每组15只，分别为假造模组，模型组，阳性对照药地塞米松组，艾叶油低、高剂量组。假造模组除外，其它4组的小鼠分别于第1，7，14天腹腔注射0.1 ml OVA致敏液（内含OVA 20μg及4 mg氢氧化铝凝胶）致敏。18，19，20，21，22 d以10 g/L OVA溶液超声雾化，通入雾化干燥器5 min后放入小鼠继续雾化20 min激发。观察小鼠反应，若有烦躁不安、呼吸急促、腹肌抽搐、两便失禁等为阳性反应。假造模组用0.9％氯化钠注射液代替OVA进行致敏和激发。各组小鼠从第18天起灌胃给药，其中假造模组、模型组给予0.9％氯化钠注射液20 ml・kg-1，阳性对照组给予地塞米松1.5 mg・kg-1，艾叶油低、高剂量组给予10，20 g・kg-1，第22天灌胃给药后，立即进行OVA激发25 min，取雾化20 min小鼠，处死小鼠，剪开颈部皮肤，并于气管正中处剪一小口，插入气管套管。用1 ml注射器取冷盐水0.5 ml灌洗肺泡，回抽液体，如此反复3次，获得支气管肺泡灌洗液（bronchial veolar lavage fluid，BALF），冲洗共3次，确保回收率在80％以上。离心（3 000 r・min-1）10 min，弃去上清液，沉淀细胞加0.2 ml缓冲液混悬。吸取0.1 ml于血球计数板上，显微镜下计白细胞总数；吸取0.01 ml涂片，瑞氏染色后计嗜酸性粒细胞（Eos）数(至少计数200个细胞)。2.2统计学分析所获数据均采用±s表示，用SPSS for Windows 10.0统计软件作重复测量数据的方差分析。3结果哮喘模型组中的白细胞总数与嗜酸性粒细胞数明显高于假造模组，两者相比具有统计学意义（P<0.01），结果说明造模成功。阳性药地塞米松组、艾叶油高剂量组的白细胞总数明显少于哮喘模型组（P<0.05）；阳性药地塞米松组的Eos明显减少，少于哮喘模型组（P<0.05）；艾叶油高剂量组的Eos明显减少，少于哮喘模型组（P<0.01）。结果见表1。表1哮喘小鼠BALF中白细胞总数和嗜酸粒细胞计数（略）4讨论支气管哮喘是变态反应临床炎性综合征，主要发病机制是再次进入的抗原诱发肥大细胞脱颗粒反应，导致后期嗜酸性粒细胞浸润，诱发呼吸道高阻力。吸入激素并不能从根本上逆转哮喘的自然病程，不能纠正潜在的免疫失调，长期使用还会减弱机体的保护性免疫力，引起全身性的副作用。中药治疗哮喘具有较好的远期疗效，以复制哮喘动物模型筛选中药及其有效部位，并在此基础上进行干预成为该研究领域的重要方法。本实验选择了经卵蛋白致敏的哮喘小鼠气道炎症模型，结果表明，艾叶油能明显减少BALF中细胞总数（P<0.05）和Eos数（P<0.01），有良好的平喘作用。【参考文献】1］李慧.艾叶的药理研究进展及开发应用［J］.基层中药杂志，2002，16(3):51.［2］谢强敏，唐法娣，王砚，等.艾叶油的呼吸系统药理研究-Ⅰ支气管扩张、镇咳和祛痰作用［J］.中国现代应用药学杂志，1998，16(4):16.［3］谢强敏，唐法娣，王砚，等.艾叶油的呼吸系统药理研究-Ⅱ抗过敏作用［J］.中国现代应用药学杂志，1999，16(5):3.［4］Walsh GM，Annunziato L，Frossard N，et al.New insights into the second generation antihistamines［J］.Drugs，2001，61:207.［5］张弘，蔡宛如，沈华浩，等.清肺止哮汤对哮喘小鼠气道炎症抑制作用的实验研究［J］.浙江中医学院学报，2004，28(5):57.［6］程晓明，钱桂生，张彦琦，等.树突细胞表面共刺激分子在小鼠哮喘模型中的作用及其机制的研究［J］.中华内科杂志，2004，43(4):272.［7］Henderson WR，Tang LO，Chu SJ，et al.A role for cysteinyl leukotrienes in airway remodeling in a mouse asthma model［J］.Atn J Respir Crit CareMed，2002，165:108.