不同培养条件对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达的影响及外膜蛋白A基因动物医学论文.doc

会员专享推荐 · 你可能也用得上更多

开通会员，畅读全站文档

本篇文档已为你保留

本篇文档价值 ~~¥35.00~~会员免费解锁

全文不限次阅读，剩余内容即刻解锁
高速下载通道，免排队、无等待
专属客服 1 对 1 答疑，优先响应
每日赠送下载券，本篇文档免费送

有 86 篇商业计划书正在上传

下载原文档

不同培养条件对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达的影响及外膜蛋白A基因_动物医学论文【中文摘要】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)感染是养鸭业重要疾病。现发现有21个血清型，各血清型之间的保护力很弱。国内外虽然已经有较多的研究，但对毒力因子，及保护性抗原的研究还未充分展开。外膜(Outer membrane)是革兰氏阴性菌细胞壁中的特有结构，位于外膜上的蛋白总称为外膜蛋白(Outer membrane proteins,Omps)。某些外膜蛋白与细菌的毒力及免疫原性有关。用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基，培养鸭疫里氏杆菌RA1型，将未加入EDTA的TSB培养的RA1型菌作对照。比较后发现，加入EDTA组的Omp的SDS-PAGE图谱发生改变，从34kD-100kD增加了多条蛋白条带，特别是39 kD，60kD和110kD蛋白浓度较大。用鸭康复血清作为一抗，自制酶标兔抗鸭为二抗作Western-blot，与对照组相比，实验组增加了39kD条带。实验证明，加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。用生物信息学软件DNAStar分析RA ATCC11845株和CVL 110／89株OmpA基因序列，推测其中一段序列为RA各血清型共有的保守序列。用Primer Premier 5.0自行设计一对引物。参考菌株和分离株均扩增出特异性的498片段，经EcoRⅠ酶切及测序鉴定，各株均为RA，重复试验证明该方法可以特异快速地鉴定RA。利用上述分析所得的RA各血清型共有的保守序列，用Primer Premier 5.0自行设计一对含双酶切位点的引物。以该菌RA2型参考株DNA为模板。501bp的PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表达载体pET-32a(+)中。将重组质粒转化大肠杆菌BL_(21)株，经IPTG诱导，表达分子量约为27KD的融合蛋白。免疫转印显示，表达的蛋白可被RA1型和RA2型全菌鸭血清识别，这可证明OMPA有位于菌体表达的结构，并能与不同血清型的RA结合。