复方双辛喷雾剂对豚鼠过敏性鼻炎的影响_药学论文【摘要】目的考察复方双辛喷雾剂对豚鼠过敏性鼻炎的治疗效果。方法以2,4-二异氰酸甲苯酯(TDI)为致敏原，建立豚鼠鼻变态反应模型,以鼻炎滴剂为对照，设置复方双辛喷雾剂高、中、低3个剂量组，经过处理，测定各组豚鼠鼻黏膜内组胺含量。结果复方双辛喷雾剂对实验性变态反应性鼻炎豚鼠模型的各种变应性鼻炎的症状和体征均有明显改善作用；与模型对照组比较,各给药组动物鼻腔分泌物量、喷嚏次数、抓鼻次数明显减少；复方双辛喷雾剂还能显著降低豚鼠鼻黏膜中组胺含量(P﹤0.01)。结论复方双辛喷雾剂对实验性变态反应性鼻炎有显著的改善作用，且具有方便、安全、副作用小等优点。【关键词】复方双辛喷雾剂豚鼠组胺变应性鼻炎Abstract:ObjectiveTo evaluate the effects of Shuangxin Nasal Spray on hypersensitive rhinitis in guinea pigs.MethodsWith toluene-2,4-diisocyanate(TDI)as sensibilisinogen,the guinea pig nasal allergy model,using rhinitis drop as comparison,high,midest and low three doses of Shuangxin Nasal spray were set up.After treatment,the histamine content was determined.ResultsShuangxin Nasal Spray could obviously improve each kind of allergic rhinitis symptoms of guinea pig allergia models.Compared in medication administration groups with the control group,the nasal secretions,the frequency of sneezing and the times of griping nose are obviously reduced.And the Shuangxin Nasal spray also could significantly decrease histamine content in the nasal mucosa of guinea pigs(P﹤0.01).ConclusionShuangxin Nasal Spray can significantly improve the allergia rhinitis,and it has many advantages,such as convenience,safety and low side effects and so on.Key words:Shuangxin Nasal Spray;Guinea pig;Histamine;Allergic rhinitis过敏性鼻炎是由IgE介导的I型变态反应，是发生在鼻黏膜的变态反应性疾病,以鼻痒、喷嚏、鼻分泌亢进、鼻黏膜肿胀等为主要特点,是耳鼻咽喉科常见病、多发病,且近年发病率呈上升趋势［1］。组胺是本病发病中的重要介质,抗组胺药仍是治疗本病主要而有效的药物。复方双辛喷雾剂的主要成分为细辛和辛夷的挥发油，细辛和辛夷都是常用于治疗鼻炎的中药，现代药理学研究表明，其有效成分均为挥发油，具有抗菌、消炎、抗组胺等作用，再配以具有疏风、清热、通窍作用的薄荷脑研制而成。本实验通过观察复方双辛喷雾剂对豚鼠变应性鼻炎鼻黏膜组胺含量的影响,并与鼻炎滴剂对照,以揭示其疗效机制。1器材与方法1.1药物与仪器复方双辛喷雾剂(主要由细辛、辛夷、薄荷脑组成,由石河子大学医学院附院药剂科研制),鼻炎滴剂(佛山德众药业有限公司生产，批号06052),正丁醇和正戊烷为分析纯，组胺标准品(购自国药集团化学试剂有限公司)，邻苯二甲醛(Sigma公司)，FSH-2A可调高速匀浆机，光学显微镜（OLYMPUS）。1.2变应性鼻炎豚鼠分组及模型的建立采用国内外公认的TDI为致敏原,对豚鼠进行鼻内给药法建立鼻超敏反应动物模型［2］。然后按体重、性别将豚鼠随机分为正常组、模型组、复方双辛喷雾剂低、中、高剂量组、鼻炎滴剂组共6组,每组8只。除正常组单纯用橄榄油10μl(每侧5μl)滴鼻外,其余每只豚鼠均用10%TDI橄榄油溶液10μl滴鼻(每侧5μl),1次/d。记录每次激发后30 min内动物的鼻痒、喷嚏、清涕出现的时间、次数与轻重程度,并打分(鼻痒:轻度1分,轻擦鼻数次;重度2分,抓挠鼻、面不止,到处摩擦。喷嚏:1～3个为1分,4～10个为2分,11个以上为3分。清涕:流到鼻前孔为1分,超过鼻前孔为2分,涕流满面3分。记录鼻痒、喷嚏、清涕,评分用叠加法计总分)［3］。连续刺激7 d,症状平均积分超过5分,鼻分泌物涂片嗜酸性细胞阳性为造模成功。从造模第8天起,TDI改为隔日刺激直至实验结束。根据Lorcn氏法［4］。自制微型小棉棒,伸入鼻腔轻擦取下鼻甲表面3次制作涂片,均匀地涂于载玻片上进行wright染色,在光镜下寻找嗜酸性细胞。大量嗜酸性细胞为造模成功。1.3给药方法每组均从造模开始后第8天进入处理过程，给药2次/d，连续14 d。除正常组和模型组每天喷相应体积赋形剂外,其余各组每天经鼻给予相应药物,剂量按人鼠体表面积折算。1.4鼻甲黏膜组胺含量测定［5，6］实验用药观察2周后,取鼻黏膜前60 min再给1次实验药物,30 min后分别荧光法测定。取鼻黏膜的方法：暴露鼻中隔及双侧鼻腔后,从基底部剪下上、中、下鼻甲,在冰上剥除软骨,用生理盐水洗去污血，滤纸吸干后准确称量组织重量,加入3 ml 0.4 mol/L的高氯酸在冰水浴中匀浆破细胞，转速20000 r/min，低温离心15 min，转速10 000 r/min，取上清组胺提取液1.6ml，将上清液置于已加1gNaCl带塞10 ml试管中,再加4.0 ml正丁醇和2.5 mol/L NaOH 0.2 ml，立即混匀,置康氏震荡器震荡5 min,静置后取出3.6 ml正丁醇相加到已加0.1 mol/L HCl1.5 ml和正庚烷2.0 ml的10 ml带塞试管中,震荡5min,弃有机相,取1.0 mlHCl相置入10 ml带塞试管中。1.0 ml HCl相用三蒸水稀释1倍,加2 ml 3%的硼酸缓冲液（pH=10）碱化,混匀并迅速加入0.1%OPT甲醇液0.1 ml，立即混匀,室温下反应5 min,加2 ml 2.5 mol/L的柠檬酸终止缩合反应,测定荧光值(激发波长350 nm,发射波长443 nm)。1.4.1标准曲线的绘制准确称量组胺标准品10 mg，以0.1 mol/L的稀盐酸稀释成2μg/ml的组胺溶液。用移液管分别移取0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于10 ml带塞试管中，不足1 ml的以0.1 mol/L的稀盐酸补足，再经上述方法测定，得到荧光读数与组胺含量的线性方程：Y=5.073 9X-37.779，r=0.998 4［Y为组胺量(ng)，X为荧光读数］2结果2.1统计方法所有计量资料采用(±s)表示,均数差异的显著性采用SPSS统计软件进行t检验。2.2 Lorcn氏法涂片检查结果正常组的豚鼠鼻腔分泌物在光镜下未见或见到少量嗜酸性细胞，其余各造模组的豚鼠鼻分泌物均见到大量红色呈球型或椭圆型的嗜酸性细胞，说明模型制作成功。2.3鼻部症状观察致敏豚鼠从第1次滴药开始,鼻腔滴药后10 min内均不同程度地出现了鼻痒和喷嚏症状,但无明显清涕.上述症状随着药次数增加而逐渐加重,并出现清涕。第4天出现典型的鼻痒、喷嚏和清涕症状。7 d后造模全部成功。正常组偶有鼻痒或喷嚏,但无清涕,与文献报道基本符合［1］。见表1。表1给药前后症状积分比较(略)2.4鼻甲黏膜组胺含量测定见表2。表2对鼻甲黏膜组胺含量的影响(略)3讨论组胺在变应性鼻炎发病的多个环节中起主导作用,是产生变应性鼻炎症状的主要炎性介质,可激动鼻黏膜上分布的三叉神经末梢上的H1受体,引起三叉神经的动作电位,产生鼻痒和喷嚏,同时可使微血管扩张、血管通透性增加、组织水肿、嗜酸性细胞增多及分泌活动亢进等。本实验表明复方双辛喷雾剂可通过抑制豚鼠鼻黏膜组胺释放,阻断组胺信息作用于鼻黏膜,收缩黏膜血管，减少炎性细胞浸润、减轻组织反应;减轻变态反应症状而起治疗作用。因此，复方双辛喷雾剂对豚鼠过敏性鼻炎的治疗是具有积极意义的，为本病的中药治疗提供了广阔的前景。【参考文献】［1］黄选兆.耳鼻喉科学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，1995：38［2］黄振华，李三鸣，曹颖林，等.曲安奈德喷雾剂对变应性鼻炎的作用［J］.沈阳药科大学学报,2004,21(6):446.［3］赵秀杰,董震,杨占泉.鼻超敏反应实验模型建立［J］.中华耳鼻喉科杂志,1993,28(1):17.［4］kingHC.otolargngologic Allergy symposia specialists［M］.Florida,1981,229.［5］Beil D,Kinder H,Paschke A,et al.Determination of histamine and leukotrienes from basophils in cells upernatants by high-performance liquid chromatography［J］.J Cromatgr Sci,1998,36:284.［6］钱彦方,孙海英.克鼻敏对过敏性鼻炎豚鼠鼻黏膜和血组胺的影响［J］.广州中医药大学学报,1997,14(2)：112.
