分析HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠-氯唑西林钠的含量-药学论文药学论文.doc

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分析HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量-药学论文_药学论文【高效液相色谱；,阳离子交换柱；,氨苄西林；,氯唑西林；,含量测定摘要摘要：用阳离子交换柱的HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠中氨苄西林和氯唑西林的含量。色谱条件摘要：采用Hypersil SCX柱，磷酸盐缓冲液(001mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值60)∶乙腈(90∶10)为活动相，检测波长225nm。氨苄西林和氯唑西林分别在45～134和44～131μg/ml范围内呈良好的线性关系，日内RSD分别为05%和06%，回收率分别为999%和1000%，含量测定结果和国家药品标准方法所得结果相符。摘要：高效液相色谱；阳离子交换柱；氨苄西林；氯唑西林；含量测定Simultaneous content determination of ampicillin and cloxacillinin a pharmaceutical formulation for injection by HPLC ABSTRACT A newly proposed HPLC method for simultaneous content determination of ampicillin and cloxacillin in a pharmaceutical formulation for injection was developed.The chromatographic condition was as follows,column摘要:Hypersil SCX;mobile phase摘要:phosphate buffer(001mol/L dibasic ammonium phosphate,adjusted to pH 60 with phosphoric acid)∶acetonitrile(90∶10);detection wavelength摘要:225nm.The standard curves were linear within the range of 45～134 and 44～131μg/ml for ampicillin and cloxacillin respectively.The precisions in a day(RSD)were 05%and 06%respectively.The assay results complied with those obtained by using the national standard method.KEY WORDS HPLC;Cationexchange column;Ampicillin;Cloxacillin;Content determination注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠是氨苄西林钠和氯唑西林钠按活性成分含量1∶1组成的复方制剂。氨苄西林/氯唑西林为广谱结合型抗生素，前者对革兰阳性和阴性菌均具有良好的杀伤功能，但不能抵御β内酰胺酶对其的破坏；后者可对β内酰胺酶产生抑制功能，对产青霉素酶和不产青霉素酶的菌株均有效，两者联合应用可相互补充各自的抗菌谱，产生协同功能，进步整体的抗菌效力。目前国内已有数家药厂根据国家药品标准［1］生产本品。由于氨苄西林和氯唑西林的疏水性相差较大，在通常的反相色谱系统［1］中，氨苄西林的容量因子约为1，和有关物质的分离较差；氯唑西林的容量因子约为30，使得分析时间很长。本文建立采用阳离子交换柱的HPLC法可同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠中的氨苄西林和氯唑西林的含量，该法可在不足10min时间内有效分离氨苄西林、氯唑西林及其主要杂质。1仪器和试药美国Agilent 1100型HPLC仪；色谱柱摘要：英国Hypersil SCX(200mm×46mm，5μm)；氨苄西林和氯唑西林对照品均购自中国药品生物制品检定所；注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠由上海新先锋药业有限公司提供；磷酸和磷酸氢二铵均为分析纯，乙腈为HPLC级，水为蒸馏水。2色谱条件活动相为磷酸盐缓冲液(001mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值60)∶乙腈(90∶10)；流速10ml/min；柱温25℃；检测波长225nm；进样体积20μl。3方法和结果对照品溶液取氨苄西林和氯唑西林对照品各20mg，精密称定，置200ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。供试品溶液取供试品50mg，精密称定，置250ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀(Fig.1)。系统适用性溶液称取供试品约50mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，室温(约25℃)放置24h，即得。氨苄西林峰和氯唑西林峰的理论板数分别约为3500和3000，拖尾因子分别为10和11，两者间的分离度约为40。3.1线性和范围取氨苄西林和氯唑西林对照品各20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液。精密量取此液75、60、50、40和25ml，分别置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，在上述色谱条件下分别进样分析。以面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，回回方程分别为摘要：氨苄西林A=16.47C 7.6 r=1.0000氯唑西林A=45.85C 10.7 r=1.0000氨苄西林和氯唑西林分别在45～134和44～131μg/ml范围内呈良好的线性关系。3.2检测限和定量限氨苄西林和氯唑西林的检测限按信噪比3∶1计均为01μg/ml，定量限按信噪比10∶1计均为03μg/ml。3.3精密度取同一批供试品，配制成6份溶液，分别进样分析，氨苄西林和氯唑西林含量的均匀值分别为4467%(RSD=05%，n=6)和4438%(RSD=06%，n=6)。3.4耐用性另选用2支相同品牌填料的色谱柱实验，均可得满足的色谱图。3.5回收率精密量取同一份供试品溶液10ml，分别置20ml量瓶中，精密量取并加进对照品储备液5ml，加水稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下进样分析。测得氨苄西林和氯唑西林的均匀回收率分别为999%(RSD=04%，n=6)和1000%(RSD=05%，n=6)。3.6样品测定采用国家药品标准方法［1］对同一批供试品进行测定，测得氨苄西林和氯唑西林的含量分别为4430%(n=3)和4491%(n=3)，和本文方法的测定结果一致。

4讨论离子交换HPLC法是建立在多重保存机理(如反相和离子交换)上的，一般可提供独特的色谱选择性，同时又具有简便和重现性好的特征［2］。本探究选用以硅胶为基质的强阳离子交换柱――Hypersil SCX柱进行实验。探究结果显示，缓冲液中磷酸氢二铵的浓度为001mol/L，pH值由50逐渐增至70时，氯唑西林的保存值明显减少，氨苄西林的保存仅稍减弱；缓冲液pH值为60时，缓冲液中磷酸氢二铵的浓度由001mol/L逐渐增至0025mol/L，氯唑西林的保存值明显增加，氨苄西林的保存仅稍增强。显然，由于“盐析(saltingout)”效应，组分的保存随着离子强度的增加而增强，表现出类似于化合物在疏水相互功能色谱(hydrophobic interaction chromatography)中的色谱行为［2b］。鉴于两组分在本色谱系统中的色谱行为和通常的离子交换色谱行为相反，即盐或缓冲液浓度的增加反而导致组分保存的增强，故可以推断，Hypersil SCX填料在本色谱系统中主要表现为疏水或反相色谱行为的特征［2b］。选择缓冲液中磷酸氢二铵的浓度为001mol/L，pH值为60时，可在不足10min的分析时间内有效1摘要:Amoxicillin;2摘要:DicloxacillinFig.2Chromatogram of sample solution(03mg/ml amoxicillin and 0.15mg/ml dicloxacillin)stored at room temperature for 24h地分离氨苄西林、氯唑西林及其主要杂质。本色谱系统尚可用于类似品种如注射用阿莫西林钠/双氯西林钠的含量测定，惟活动相需稍作调整为磷酸盐缓冲液(0005mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值为64)∶乙腈(90∶10)，同样可在不足10min的分析时间内有效地分离阿莫西林、双氯西林及其主要杂质(Fig.2略)。参考文献［1］国家食品药品监视治理局.国家药品标准WS10001(HD0620)2002.注射用氨苄西林钠氯唑西林钠［S］.2002摘要：7，88［2］Snyder L R,Kirkland J J,Glajch J L.Practical HPLC Method Development［M］,2nd ed.New York摘要:John Wiley&Sons,Inc.,1997,a摘要:341;b摘要:345(上接第22页)J Clin Microbiol,2002,40(10)摘要:3703［5］熊自忠，朱德妹，汪复，等.肺炎克雷伯菌K9921029中的ESBLs基因型分析［J］.中国抗生素杂志，2003，28(2)摘要：96［6］顾怡明，张杰，唐明忠，等.产超广谱β内酰胺酶细菌的耐药性和基因型调查［J］.中国医师杂志，2004，6(1)摘要：13［7］孙景勇，倪语星.CTXM3超广谱和TEM1广谱β内酰胺酶基因同时存在于大肠埃希菌［J］.中华微生物和免疫学杂志，2001，12(Suppl)摘要：75［8］魏泽庆，陈亚岗，俞云松，等.多重耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及β内酰胺酶基因型探究［J］.中华检验医学杂志，2002，25(6)摘要：329［9］Aroonwadee C,Fatima H M,John H,et al.Three cefotaximases,CTXM9,CTXM13,and CTXM14,among Enterobacteriaceae in the People′s Republic of China［J］.Antimicrob Agents Chemother,2002,46(3)摘要:630［10］陈炫，范昕建，吕晓菊，等.产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的耐药基因序列分析［J］.中华传染病杂志，2004，22(2)摘要：102［11］Corkill J E,Cuevas L E,Gurgel R Q,et al.SHV27,a novel cefotaximehydrolysing betalactamase,identified in Klebsiella pneumoniae isolates from a Brazilian hospital［J］.J Antimicrob Chemother,2001,47(4)摘要:463。