丹参延缓高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化形成的形态学研究药学论文.doc

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丹参延缓高同型半胱氨酸血症兔动脉粥样硬化形成的形态学研究_药学论文作者：周玲生，张海燕，周路坦【摘要】目的探讨丹参对高同型半胱氨酸血症(Hhcy)兔动脉粥样硬化的干预作用。方法随机将40只家兔分成对照组(A)，蛋氨酸组(B)，高脂组(C)，丹参+蛋氨酸组(D)，分别于实验0，4，8周检测各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)改变和病理学观察腹主动脉血管病理变化。结果B组第4，8周时血浆Hcy含量显著高于同时段A组(P<0.01);D组与B组比较，4周水平接近，8周末时低于同时段B组(P<0.01)。说明随用药时间延长,丹参干预组血浆Hcy含量上升幅度明显小于同时段蛋氨酸组。病理学变化：B组、C组腹主动脉大体观察有明显粥样斑块形成;D组与正常组比较无明显差异。结论HHcy可致动脉粥样硬化的形成，丹参具有延缓或干预其动脉粥样硬化形成的作用。【关键词】动脉粥样硬化;丹参;高同型半胱氨酸血症本研究分别采用高L-蛋氨酸建立兔Hhcy血症模型和高脂饮食方法建立兔高脂血症模型，通过与对照组、丹参+蛋氨酸组形成动脉粥样斑块的比较，及各组血浆同型半胱氨酸(Hcy)含量的比较，观察Hhcy致AS形成机制;检验丹参对Hhcy引起AS病理过程的干预效果，为Hhcy的防治、延缓或防治AS的形成，降低心、脑血管病的发生风险拓宽新思路，提供新靶点。1材料与仪器1.1动物筛选健康雄性中国家兔40只(由武汉万千嘉禾实验动物养殖有限公司提供)，月龄3～5个月，体质量在1.5～2.0 kg。1.2药品与试剂丹参中草药购于河南省南阳市医药公司，由南阳医学高等专科学校药理教研室按比组方，经煎制、过滤、浓缩为1 g/ml(以生药汁)丹参口服液，高压灭菌，0℃冰箱保存备用。高L-蛋氨酸购自张家港市华昌药业有限公司。Hcy试剂盒由北京九强生物技术有限公司提供。1.3仪器美国GELg-9彩色多普勒超声诊断仪(TOSHIBA生产)，TBA-120FR生化分析仪，TU-1810紫外分光光度计，Bio-rad680酶标仪，(2/2)VI普通Ⅰ类B型脱水机，孝感宏业TS-12L，日本原装进口(1/2)JVCTK-C921EC显微镜摄像机，日本原装进口OLYMPUSCX31显微镜，德国原装进口mICROMGMBH Hm200切片机，CS-摊片机。2方法2.1动物分组实验动物以标准饲料适应性喂养1周后，随机分为4组，即：对照组(A)，蛋氨酸组(B)，高脂组(C)，丹参+蛋氨酸组(D)。每组10只。A组：喂标准饲料+等量的生理盐水灌胃;(B)组：喂蛋氨酸饲料，即标饲+蛋氨酸0.1 g/(kg·d)用蒸馏水稀释灌胃;(C)组：喂高脂饲料(标饲+2%胆固醇+5%猪油)+等量的生理盐水灌胃;D组：所喂饲料同蛋氨酸组,同时给予丹参口服液3.3 g/(kg·d)灌胃。各组动物饲料按每天100 g/只计算，分笼喂养，自由饮水，隔周称重，调整给药量，连续喂饲8周。上述各组兔均限食量,每兔每日100 g。2.2 Hcy含量检测分别于喂药的第0，4，8周末时，自兔耳缘静脉采血2 ml，离心后用循环酶法检测血浆Hcy含量。2.3病理观察实验第8周末,颈动脉放血处死动物。立即取降主动脉至腹主动脉分叉处血管，10%甲醛固定、取材、脱水、血管横断包埋、石蜡切片、HE染色、光镜观察。2.4统计学分析各组数据用±s表示,并用SPSS13.0统计学软件进行处理，组间进行F检验判定，P<0.05有统计学意义。3结果3.1各组家兔血浆Hcy含量的变化0周时各组血浆Hcy含量分布符合正态分布，其95%的可信区间为16.67～22.44μmol/L(即正常参考值)，超过此值上限确定为兔高同型半胱氨酸血症(Hhcy)。B组在第4周、8周末时Hcy均显著高于同期对照组(P<0.01);C组两时段Hcy含量均与A组接近无显著差异;D组与B组比较,4周Hcy水平接近，8周末时低于同时段B组(P<0.01)。说明随用药时间延长,丹参干预组血浆Hcy含量上升幅度明显小于同时段蛋氨酸组。实验期间各组家兔一般情况良好，B组有2只，C组1只死亡。结果见表1表1各组家兔血浆Hcy含量比较3.2各组家兔腹主动脉血管病理变化大体观察：沿腹主动脉管壁剪开，A组、D组动脉内膜无明显斑块形成，B组、C组可见内膜不规则隆起斑块。镜下观察：A组无粥样斑块形成;血管内膜薄而光滑，与外膜平行，连续性好，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁厚薄均匀(见图1)。B组：血管内膜明显增厚，斑块突出于内膜面，内膜下大量排列不规则平滑肌细胞，中层结构紊乱，斑块深部的泡沫细胞有变性坏死、崩解，形成细颗粒状粥糜状物质，中膜变浅，浅层肌纤维分离断裂(见图2);C组腹主动脉血管形成典型粥样斑块病变,由富含大量泡沫细胞的表层及相对纤维化的内层构成(见图3);而D组血管内膜光滑，有轻度增厚，内膜下有少许含脂质的泡沫细胞，中膜平滑肌细胞排列整齐，管壁厚薄均匀(见图4)。4讨论4.1 HHcy兔模型制备成功本研究给家兔喂食高蛋氨酸饲料，实验第0，4，8周时测定血清Hcy水平，4，8周时蛋氨酸组血清Hcy含量均显著高于同时段对照组，表明兔Hhcy模型制备成功。腹主动脉组织学观查，血管内膜明显增厚，中层结构紊乱，有细颗粒状粥糜样物质及斑块形成，均为动脉硬化的改变，进一步证实，Hhcy可引起动脉血管发生病理改变，是致动脉粥样硬化的独立危险因素。图1 A组血管(HE染色，40×)图2 B组血管(HE染色，40×)图3 C组血管(HE染色，40×)图4 D组血管(HE染色，40×)4.2 Hhcy致动脉粥样硬化的机制Hhcy致动脉粥样硬化的机制目前尚未完全阐明，可能与血管内皮损伤和功能失调、刺激血管平滑肌增殖、促进血小板聚集、破坏体内凝血与纤溶之间的平衡等因素有关[1,2]。实验结果提示，Hhcy家兔体内氧化应激增强，Hcy是多功能损伤因子，其分子中含自由的巯基，在自身氧化生成同型胱氨酸的同时，生成多种强氧化产物(如H2O2、氧自由基等)，造成血管内皮细胞的损伤和强烈的毒性作用，而且Hcy的升高可抑制SOD的表达和分泌，导致内皮细胞抗氧化机制受损，并加强了超氧自由基介导的NO灭活作用，引起内皮细胞功能失调，破坏细胞的完整性，使血管内皮细胞骨架结构发生变化，Hcy还能促进脂蛋白的沉积，并被巨噬细胞吞噬形成泡沫细胞，加速低密度脂蛋白氧化，损伤血管内皮细胞，引起动脉粥样硬化斑块形成。4.3丹参能干预Hhcy兔动脉粥样硬化的形成本研究丹参+蛋氨酸组病理观察无明显斑块形成，考虑机理一是可能是丹参能增强纤溶酶的活性，促进纤维蛋白溶解，调节Hhcy兔体内凝血与纤溶之间的平衡等因素有关;二是丹参有消除有害自由基，防止或减轻脂质过氧化反应[3]。【参考文献】[1]吴军民，王彤歌.同型半胱氨酸血症和脑卒中[J].医学综述，2001,7(11)：677.[2]刘娜，张书平，曹治寰，等.高同型半胱氨酸血症对老年人血管疾病的影响[J].临床荟萃，2003，18(19)：1139.[3]董春桃.丹参药理作用与临床应用进展[J].山西医药杂志，2007，1(1)：54.