齐墩果酸对肝损伤的作用探讨齐墩果酸对肝损伤的作用探讨_官方征稿论文预读:摘要：1材料和方法1.1动物SPF级ICR小鼠,雄性,体质量16～18g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,生产许可证号:SCXK(湘)2011-0003,合格证编号:N0.4304701691.SPF级SD大鼠,雄性,体质量160～180g,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,生产许可证号:SCXK(湘)2011-0003,合格证编号:N0.43004700001669.动物房室温:19～26℃;湿度:40%～70%;每日照明10h(8Am～6Pm)熄灯14h,给予常规的实验室饮食,自由饮水;全价营养颗粒饲料:购自江西省实验动物中心.1.2方法1.2.1对ANIT致小鼠肝损伤模型的影响:取小鼠按体质量均匀随机分为4个组,每组10只,分别为空白组、模型组、联苯双酯200mg/kg组和齐墩果酸80mg/kg组.供试品组灌胃给药,1次/d,空白组和模型组给予等容积蒸馏水,灌胃容积均为20mL/kg体质量,连续给药7d;除空白组外,其余组小鼠均用100mg/kgANIT溶液20mL/kg给予灌胃,48h后采血,(灌胃ANIT前禁食不禁水16h,灌胃后禁食不禁水4h),采血前禁食不禁水16h,摘除小鼠眼球取血,室温静置10min,3500rmp离心15min,分离血清,按试剂盒说明分别测血清ALT、AST和TBIL.脱颈椎处死小鼠,剖腹取肝、脾,称其脏器质量,计算其脏器指数,脏器指数=脏器质量/体质量×100,记录数据.另取肝脏左叶同部位组织,用10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋、切片、HE染色、透明封片、光镜下观察.1.2.2对ANIT致大鼠肝损伤模型的影响:取大鼠按体质量均匀随机分为4个组,每组10只,分别为空白组、模型组、联苯双酯100mg/kg组和齐墩果酸40mg/kg组.供试品组灌胃给药,1次/d,空白组和模型组给予等容积蒸馏水,灌胃容积均为10mL/kg体质量,连续给药7d;除空白组外,其余组小鼠均用80mg/kgANIT溶液10mL/kg给予灌胃,48h后采血,(灌胃ANIT前禁食不禁水12h,灌胃后禁食不禁水4h),采血前然后禁食不禁水12h,摘除小鼠眼球取血,室温静置10min,3500rmp离心15min,分离血清,按试剂盒说明分别测血清ALT、AST、ALP、GGT、TBIL和DB.脱颈椎处死大鼠,剖腹取肝、脾,称其脏器质量,计算其脏器指数,脏器指数=脏器质量/体质量×100,记录数据.另取肝脏左叶同部位组织,用10%甲醛固定,常规脱水,石蜡包埋、切片、HE染色、透明封片、光镜下观察.1.3统计方法数据采用x珋±s表示,数据采用DAS3.0软件进行t检验统计;两组数据比较,P＜0.05,为有显著性差异,P＜0.01,为有非常显著性差异.2结果2.1联苯双酯200mg/kg和齐墩果酸80mg/kg对ANIT致肝损伤小鼠的影响联苯双酯200mg/kg可增加其肝质量和肝指数趋势,但与模型组比较无差异(P＞0.05).齐墩果酸80mg/kg可降低肝损伤小鼠AST、ALT和TBIL值,与模型组比较有显著意义(P＜0.05);而联苯双酯却能显著增加肝损伤小鼠AST和TBIL值,与模型组比较有非常显著意义(P＜0.01),结果见表1、2.大体病理检查结果表明:空白组肝组织外观红褐色,质软富弹性;模型组小鼠肝脏色泽稍黄,肝脏稍肿大,边缘钝厚,质脆;齐墩果酸组小鼠肝脏外观与模型组差异不明显;但联苯双酯组肝脏与模型组比较明显偏大.病理组织学检查:空白组肝组织结构正常,肝小叶结构清楚,细胞索排列整齐,肝血窦正常;模型组肝内出现多个点状或大片状坏死.齐墩果酸组肝内也可见少量点状坏死和偶见大片状坏死,坏死程度比模型组明显减轻;而联苯双酯组肝内也可见大量大片状坏死,坏死程度与模型组比较有显著性差异.2.2联苯双酯100mg/kg和齐墩果酸40mg/kg对ANIT致肝损伤大鼠的影响齐墩果酸40mg•kg－1可显著增加大鼠肝质量和肝指数,但与模型组比较有显著性差异(P＜0.01).联苯双酯可显著降低肝损伤小鼠AST、ALT和ALP值,与模型组比较有显著性意义(P＜0.01);而齐墩果酸却能增加肝损伤小鼠AST和ALT值,但与模型组比较无显著差异(P＞0.01),结果见表3、4、5.大体病理检查结果表明:空白组肝组织外观红褐色,质软富弹性;模型组肝脏色泽稍黄,肝脏稍肿大,边缘钝厚,质脆;联苯双酯组肝脏外观与模型组差异不明显;齐墩果酸组肝脏与模型组比较明显偏大.病理组织学检查:空白组肝组织结构正常,肝小叶结构清楚,细胞索排列整齐,肝血窦正常;模型组肝内出现毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症,多个点状或片状坏死;而齐墩果酸组和联苯双酯组肝内也可见点状、片状坏死和毛细胆管增生,以及小叶间胆管周围产生炎症,坏死程度与模型组无明显差异.结果见图2.3讨论ANIT是一种间接肝毒剂,它主要损伤肝内胆管上皮细胞,引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症,从而造成胆管阻塞,形成明显的胆汁郁积,并伴以点状坏死为主的肝实质细胞损害,产生胆汁郁积性黄疸,出现高胆红素血症和胆汁分泌减少.目前常用黄疸动物模型为灌胃给予实验动物ANIT造成,通常实验动物为小鼠和大鼠.在一般肝损伤动物试验中常用的阳性药为联苯双酯,联苯双酯确实对肝损伤实验动物具有保肝降酶作用,但对ANIT造成的黄疸型肝损伤动物模型是否具有治疗作用,我们在ANIT造成黄疸模型动物试验过程中发现,联苯双酯对ANIT造成的小鼠黄疸肝损伤动物模型并没有降酶作用,相反能升高其ALT、AST和TBIL作用,而我们另外设置的阳性组齐墩果酸对ANIT造成的小鼠黄疸肝损伤动物模型具有保肝降酶退黄作用.同时,我们在ANIT造成大鼠黄疸模型试验结果表明,联苯双酯是具有保肝降酶作用,而齐墩果酸却没有此作用.造成此原因本次试验未能进行进一步深入研究,可能是由于动物种属导致.综上所述,在进行ANIT造成黄疸模型动物试验中,要根据具体实验动物和种属而选择相应的阳性对照药;小鼠ANIT黄疸型肝损伤试验中选用齐墩果酸作为阳性药,而大鼠ANIT黄疸型肝损伤试验中选用联苯双酯作为阳性药.
