针灸对肥胖老鼠血清的作用论文针灸对肥胖老鼠血清的作用论文预读:摘要:作者：孙立虹李文丽肖红玲赵志国吴中秋张书义梁玉磊马红利葛建军单位：河北医科大学中医学院随着人们物质生活水平的提高,肥胖症的发病率迅速增长,现已证实在肥胖人群中糖尿病、冠心病、高血压、中风等疾病的发病率明显高于正常人群,肥胖症已成为当前严重威胁人类健康的主要疾病之一.因此,对该病的治疗已成为当今医学界研究的热点.目前,中医在减肥方面的研究已取得了很大的进展,尤其是针灸减肥凸显优势.因针刺方法和刺激强度的不同,体针与电针在神经传导通路、对神经递质和免疫分子的影响以及临床应用等方面都存在显著差异［1］.本实验通过体针与电针刺激对实验性肥胖大鼠Lee’s指数、肾周脂肪细胞直径、面积和体积、血清和下丘脑神经肽Y(NPY)含量的比较观察,探讨两种针刺方法调节血清和下丘脑NPY异常的作用机制以及对减肥效应影响的差异性,以期为临床合理选择针刺方法治疗单纯性肥胖症提供可靠的实验依据.1材料与方法1.1造模与分组选取出生1d的清洁级SD大鼠10窝(平均每窝10只,雌雄随机),体重平均在10g左右,由河北医科大学实验动物中心提供(合格证号811035).1．1．1造模方法参照文献报道［2～4］的下丘脑型肥胖模型,并在实验中进行改进.置于室温为25℃左右明暗各12h的清洁级动物实验室,适应性喂养1d后开始复制模型.随机从每窝乳鼠中抽取7～8只按每只0.2ml/(10g•d)在颈部皮下注射15%L-谷氨酸钠(L-MSG)0.9%氯化钠溶液,其余乳鼠注射0.9%氯化钠溶液作为对照,连续5d.21d龄左右断乳,雌雄分笼饲养,经L-MSG处理的大鼠均喂高脂饲料,未经L-MSG处理的大鼠喂普通平价饲料.36d龄造模结束,模型大鼠Lee’s指数大于正常大鼠30以上为造模成功［5］,舍去不符合标准的大鼠,共得到肥胖模型大鼠60只.普通平价饲料和高脂饲料均由河北医科大学实验动物中心提供.1．1．2分组将60只肥胖模型大鼠随机分为3组,即体针组、电针组和模型组,每组20只,继续喂高脂饲料;注射0.9%氯化钠溶液的大鼠20只作为正常组,继续喂普通平价饲料.1.2主要试剂与仪器神经肽Y(NPY)放射免疫分析药盒(北京普尔伟业生物科技有限公司),韩式WQ1002F电针仪(北京中医药大学赛莱科贸),Humalyzer2000型生化分析仪(德国Humalyzer公司),MSE-25型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂),LEICA、RM2125型切片机(德国LEICA公司),FJ-2021γ放射免疫计数器(国营二六二厂),FA2004型上皿电子天平(上海精科天平仪器厂),医学图像分析系统(北京航空学院).1.3治疗方法1.3.1体针组在不做麻醉的情况下,将实验大鼠固定于自制束鼠器上,按照《中国兽医针灸学》的方法取穴,并参照人体有关穴位,以动物比较学方法定位［6］,取大鼠“曲池”、“足三里”、“丰隆”、“三阴交”、“中脘”和“关元”穴,常规消毒后选用28号0.5寸毫针针刺,均采用平补平泻法(捻转角度270°,捻转频率100次/min)［7］,捻转行针1min,每5min行针1次,留针30min,1次/d,连续针刺28d.1.3.2电针组固定、取穴同体针组一致,常规消毒后用28号0.5寸毫针针刺,进针后接通WQ1002F型韩氏电针仪,采用疏密波,频率为100Hz［8］,强度以针柄震颤,且动物能保持安静不挣扎嘶叫为度,30min后停针,1次/d,连续针刺28d.1.3.3模型组、正常组用与体针组同样的方法将实验大鼠在自制束鼠器上固定30min,1次/d,连续28d,此外不施加任何干预措施.1.4样本采集1.4.1血清实验期间无实验大鼠异常死亡.4组于实验结束第2天禁食12h,股动脉采血若干毫升,加入预冷的并加有①抗凝剂:1%肝素(每毫升全血20ul);②抑肽酶(每毫升全血500U)的塑料试管中,4℃3000r/min,离心5min,提取上清液测定血清指标.1.4.2下丘脑组织匀浆的制备股动脉放血处死后迅速断头,在冰盘上取出下丘脑,将下丘脑组织用冰0.9%氯化钠溶液冲洗,快速放入浓度为0.1mol/L的1ml乙酸(HAC)中轻轻研磨,100℃水浴中煮沸10min,再次研磨制成匀浆,4℃4000rmp,离心20min提取上清液,－20℃冻存待检.1.4.3脂肪重量大鼠处死后,快速完整地剥离大鼠左肾周脂肪,称其湿重后用10%多聚甲醛固定.1.5检测指标及方法1.5.1Lee’s指数由专人分别在针刺治疗前后测量4组大鼠的体重、体长(鼻至肛门的长度),每只大鼠测2次,如果2次所测值相近取其平均值,若相差很大,测量第3次取相近两值的平均值作为测量结果,计算其Lee’s指数(Lee’s指数=体重(g)1/3×103/体长(cm)［9］).1．5.2血清NPY含量测定采用放射免疫分析方法测定血清NPY的含量,所有测定步骤和计算公式均严格按照试剂盒说明书操作.1.5.3脂肪组织制备快速完整地剥离大鼠左肾周围脂肪,称其湿重后用10%多聚甲醛固定.1.5.4脂肪细胞病理形态学观察取固定1周的脂肪组织,75%乙醇梯度脱水,常规石蜡包埋,冠状切片厚度为4μm～6μm,HE染色,400倍光镜下随机采集3～4个视野的图像观察脂肪细胞的组织形态学状态.1.6统计学处理采用SPSS13.0统计软件进行统计学分析,数据以均数±标准差(x珋±s)表示,组间比较用单因素方差分析,后用单因素q检验做组间两两比较,P＜0.05为差异有统计学意义.2结果2.1针刺对肥胖大鼠Lee’s指数的影响表1显示,造模后模型组、电针组、体针组大鼠的Lee’s指数［6］差异有统计学意义(P＜0.01),说明下丘脑性肥胖大鼠模型复制成功;模型组、电针组、体针组Lee’s指数比较无差异(P＞0.05),说明在施加处理因素前这3组大鼠之间无明显差别,具有可比性.针刺干预4周后,模型组大鼠Lee’s指数高于正常组(P＜0.01),体针组和电针组较模型组下降(P＜0.01,P＜0.05),体针组较电针组下降明显(P＜0.05).2.2针刺对肥胖大鼠血清、下丘脑NPY影响表2显示,针刺干预4周后,模型组大鼠血清、下丘脑NPY含量较正常组明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);体针组和电针组血清NPY含量、下丘脑NPY含量较模型组均降低,差异有统计学意义(P＜0.01,P＜0.05).体针组较电针组降低明显,差异有统计学意义(P＜0.05),体针组优于电针组.2.3不同针刺方法对肥胖大鼠肾周脂肪细胞直径、面积、体积的影响表3图1显示,针刺干预4周后,模型组大鼠肾周脂肪细胞的平均直径、面积、体积较正常组均明显增大,差异均有统计学意义(P＜0.01);电针组和体针组肥胖大鼠肾周脂肪细胞的平均直径、面积、体积较模型组均明显减小,差异均有统计学意义(P＜0.01),体针组较电针组减小明显,差异有统计学意义(P＜0.01).3讨论中医学认为肥胖症的发生与胃肠、脾、肾关系密切,其病机为本虚标实,主要是由于脾胃虚弱,运化失司或肾阳亏虚,不能化气行水,导致痰、湿、瘀、浊停聚而发病.我们针对本病之病机,以“健脾益肾,除湿化痰,祛瘀泄浊”为法,治疗从脾、胃、肾、大肠入手,故选取足三里、三阴交、关元、中脘、丰隆、曲池六穴为方.足三里为足阳明胃经之合穴,以健运脾胃、除湿化痰;三阴交为足厥阴、足太阴、足少阴经的交会穴,一穴通三经,一穴调三脏,具有健脾补肾、除湿利水、调血祛瘀之功效,同时足太阴脾经与足阳明胃经相表里,故三阴交亦可加强足三里健脾祛湿、化痰降浊的作用;中脘为胃之募穴,又为腑会,关元为小肠之募穴,二者相合具有健脾和胃、分清泌浊、除湿化痰之功.研究证实,针刺中脘可以抑制胃肠蠕动和胃酸的分泌,从而起到减食降重的作用.此外,关元为足三阴经与任脉的交会穴,又为“阴中求阳”之穴,具有补益肾阳、促进气化的作用,同时亦可温运脾阳,加强脾之运化,使体内脂膏转化为可被消耗的物质;丰隆为胃经络穴,沟通脾、胃两经,可健脾除湿、蠲化痰浊;曲池为手阳明大肠经合穴,可通利肠腑、降浊消脂.六穴同用,相得益彰,共同发挥健脾益肾、和胃通腑、除湿化痰、祛瘀降浊之功.NPY是目前所知最强效的食物摄入诱导剂之一.Zarjevski等［10］发现,当长期在脑室中给予NPY,可导致多食、体重增加、血甘油三酯增高,增加肝和白色脂肪组织的生脂活性.NPY还可以降低交感神经(SN)对棕色脂肪的作用,能抑制产热［11,12］,使机体产热减少,同时促进白色脂肪对葡萄糖的利用和提高脂蛋白酯酶活性,从而增加脂质在脂肪细胞中的储积［13］,使体脂储存增加、体重上升,故NPY调节失控可导致肥胖［14］.本实验证实,针刺干预前,模型组、电针组、体针组大鼠Lee’s指数、肾周脂肪细胞直径、面积、体积、血清和下丘脑NPY含量均明显高于正常大鼠.干预后,体针组、电针组大鼠Lee’s指数、血清和下丘脑NPY含量均下降,肾周脂肪细胞直径、面积、体积均减少,说明体针和电针均具有减肥减脂及调节血清和下丘脑NPY异常水平的作用,但体针明显优于电针.此外,在实验过程中我们发现,快频率的捻转毫针(1次/5min)产生的穴周肌电变化与100Hz高频电针刺激引发的穴周肌电变化无差异性,因此认为二者对大鼠的刺激效应相似［15］,也可为今后的实验提供参考依据.综上所述,体针和电针在降低体重的同时,可能是通过抑制下丘脑NPYmRNA的表达、减少下丘脑NPY神经元合成和分泌过多的NPY,从而降低外周和中枢NPY水平,使能量消耗增加,摄食减少,从而达到减肥之目的.
