云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的含量测定药学论文.doc

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云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的含量测定_药学论文作者：来国防，程宾，罗士德，王易芬【摘要】目的建立HPLC法测定云南不同产地滇龙胆中龙胆苦苷的方法。方法色谱柱为Waters Sunfire RP18(250 mm×4.6 mm，5μm)柱，流动相为甲醇-水溶液(20∶80)，柱温35℃，体积流量1.0 ml/min，检测波长270 nm。结果龙胆苦苷在0.077 4～1.160 4 mg(r=0.999 8)线性关系良好，平均回收率为98.8%(RSD=1.86%，n=9)，检测10批样品其龙胆苦苷的含量在2.75%～4.87%之间。结论该方法简便快速、准确，可为评价滇龙胆药材质量提供依据。【关键词】高效液相色谱法;滇龙胆;龙胆苦苷Abstract：ObjectiveTo establish the method of the gentiopicroside in the plant of Gentiana rigescens from different regions in Yunnan province by HPLC.MethodsThe Watres Sunfire C18(4.6mm×250mm,5μm)was used,with mixture liquid of methanol and water(20:80)as mobile phase.The detection wavelength was 270 nm,the column temperature was 35℃,and the flow rate was 1.0ml/min.ResultsGentiopicroside showed a good linear relationship within the range of 0.0774～1.1604 mg(r=0.9998),the recovery rate was 98.8%,and RSD was 1.86%(n=9).The gentiopicroside content of Gentiana rigescens in 10 different regions was within the range of 2.75%～4.87%.ConclusionThe method is simple and accurate，and can be used to identify and evaluate the quality of Gentiana rigescens.Key words：HPLC;Gentiana rigescen;Gentiopicroside龙胆为常用中药，《中国药典》收载龙胆Gentiana scabra Bge.，条叶龙胆G.manshurica Kitag.，三花龙胆G.triflora Pal1.或坚龙胆G.rigescens Franch.的干燥根及根茎，前3种习称“龙胆”，后一种习称“坚龙胆”。坚龙胆主产云南又称为滇龙胆。滇龙胆含多种化学成分，如环烯醚萜类，生物碱类，挥发油类等，其中环烯醚萜类是其特征性成分，其功效有清肝火、除湿热、健胃等[1]。为充分利用云南丰富的龙胆药材资源，本实验以龙胆苦苷为指标成分，采用HPLC法测定了采自云南不同地区的10份滇龙胆样品，为评价滇龙胆药材质量提供一定的科学依据。1材料1.1样品来源实验所用滇龙胆样品，经中国科学院昆明植物研究所罗士德研究员鉴定，为龙胆科滇龙胆G.rigescens Franch.的干燥根及根茎，其植物标本存放于中国科学院昆明植物研究所。1.2仪器与试药美国Waters 2695高效液相色谱仪及其配套工作站，DAD检测器检测，甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)，水为二次蒸馏水，0.45μm针式微孔滤膜，其他试剂均为分析纯，龙胆苦苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110770-200510，供含量测定用。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为Waters Sunfire RP18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为甲醇-水溶液(20∶80)，柱温35℃，体积流量1.0 ml/min，检测波长270 nm。2.2对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品9.67 mg置入25 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，即得。2.3供试品溶液的制备取滇龙胆干燥的根粉碎后过4号筛，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率20 kHz)15 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，混匀，滤过，取续滤液，即得。2.4线性关系考察精密吸取龙胆苦苷对照品溶液2，5，10，15，20，30μl注入液相色谱仪进行测定。以峰面积(Y)对进样浓度(X)进行回归处理，得到龙胆苦苷回归方程为：Y=12 887 230X–147 037.8(r=0.999 8)，线性范围为0.077 4～1.160 4 mg/ml。见图1～2。图1龙胆苦苷对照品图2滇龙胆样品2.5精密度实验精密吸取对照品溶液10μl，连续进样5次，测定龙胆苦苷峰面积，结果其RSD为1.40%，表明仪器的精密度良好。2.6重复性实验取同一样品，按“2.3”项下的方法平行制备6份供试品溶液，进行测定，计算龙胆苦苷质量分数，RSD为1.36%，表明该条件重复性良好。2.7稳定性实验将同一样品已制备好的供试品溶液在室温下放置0，2，4，6，8，10 h后分别进样10μl进行测定，计算龙胆苦苷质量分数，RSD为1.43%，表明在本实验条件下供试品溶液在室温下放置10 h内基本稳定。2.8回收率实验取云南(通海)滇龙胆样品粉末9份各约0.25 g，精密称定，分别按其质量分数的80%，100%，120%精密加入龙胆苦苷对照品适量，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，进行测定，计算加样回收率，结果平均加样回收率为98.8%，RSD为1.86%，表明本法回收率较好。2.9样品测定取云南10个不同地域的滇龙胆样品的根，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，进行测定，以外标法计算龙胆苦苷的质量分数。结果见表1。表1云南不同地域滇龙胆中龙胆苦苷的测定结果3讨论3.1提取条件的考察以龙胆苦苷为指标，采用正交实验考察了药材粒度、提取溶剂、溶剂用量、提取方法等因素对实验结果的影响，结果表明提取溶剂、加热回流对试验结果有显著影响，其余因素影响甚微，优选出的最佳提取条件为药材粉碎成中粉，加50倍量的甲醇超声处理15 min。3.2检测波长的选择参考《中国药典》2005年版Ⅰ部龙胆药材含量测定项下的检测波长为270 nm，故本实验检测波长仍选用270 nm。3.3流动相的考察根据文献报道[2～4]，目前测定龙胆苦苷是HPLC方法，所采用流动相系统有甲醇-水，乙腈-水，甲醇-0.4%磷酸溶液等，再根据具体的仪器及色谱柱调节流动相比例，本实验参照《中国药典》2005年版Ⅰ部龙胆药材含量测定项下流动相系统，即：甲醇-水，并在此基础上进行适当调节，最终选择甲醇-水(20∶80)。【参考文献】[1]吴征镒，周太炎，肖培根，等.新华本草纲要，第2册[M].上海：上海科学技术出版社，1991：392.[2]国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部[S].北京：化学工业出版社，2005：64.[3]吴志平，张发成，毛志英.HPLC法测定骨刺消痛胶囊中龙胆苦苷的含量[J].药学与临床研究,2008，16(5)：408.[4]俞桂新，王峥涛，董婷霞，等.龙胆药材中龙胆苦苷的含量测定[J].上海中医药杂志，2005，39(11)：53.