脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化.doc

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脂多糖应激新分子融合蛋白的高表达及纯化目的在原核表达系统中表达脂多糖应激新分子编码的蛋白质.方法PCR扩增Hlrg Cdna编码区,克隆入表达载体pcTAT中,构建成融合6His的表达载体pcTAT-lrg,转化E.coli BL21(DE3),以IPTG诱导.表达产物用SDS-PAGE及凝胶光密度扫描分析,用Ni-NTA亲和层析柱纯化.结果经过IPTG诱导4 h,表达出相对分子质量(Mr)约25 000的蛋白,占菌体总蛋白的51%.表达产物为可溶性的,用Ni-NTA亲和层析柱纯化的表达蛋白达到电泳纯.加入培养液中的纯化蛋白,可在30 min内进入HEK293细胞.结论在E.coli中成功地高表达人Lrg融合蛋白,并对其进行初步纯化,为人Lrg功能的研究打下基础.常文辉,CHANG Wen-hui(陕西省疾控中心)侯立朝,HOU Li-chao(第四军医大学西京医院,麻醉科)刘承利,陈苏民,柴玉波,LIU Cheng-li,CHEN Su-min,CHAI Yu-bo(第四军医大学生物化学与分子生物学教研室)。