冠心病患者ApoE基因多态性与血脂及颈动脉病变的相关性研究.docx

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di101319/jisn20967®X202105008引用本文格式:唐俊,张斌强，徐先琳,等冠心病患者ApoE基因多态性与血脂及颈动脉病变的相关性研究［J］湖北医药学院学报,2021,40(5):486-490冠心病患者ApoE基因多态性与血脂及颈动脉病变的相关性研究唐俊，张斌强，徐先琳，李小雷，陈俊，闵新文，周心涛，陈继舜(湖北医药学院附属国药东风总医院心内科，湖北十堰442008)［摘要］目的：探讨冠心病患者血脂及颈动脉病变与ApoE基因多态性的相关性。方法：选取2019年1月至2020年8月在我院行冠脉造影术证实冠心病旦均行颈动脉超声检查诊断为颈动脉粥样硬化斑块形成者，所有患者均规律服用他汀类药物调脂治疗，共计280例，均行实时荧光定量PCR检测ApoE基因多态性，并根据ApoE基因型分为3组，E2表型组：基因型为E2/2+E2/3者;E3表型组：基因型为E3/3+E2/4者;E4表型组：基因型为E3/4+E4/4者。比较3组的一般临床资料、血脂、颈动脉内中膜厚度(IMT)、颈动脉斑块厚度及狭窄有无差异，并分析与ApoE基因多态性的相关性。结果：⑴在280例患者中，检测出6种基因型:E2/2(4例)、E2/3(39例)、E3/3(146例)、E2/4(19例)、E3/4(70例)、E4/4(2例)；(2)3组间一般临床资料比较，差异均无统计学意义(P〉005);⑶总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平在E4组中高于E2、E3组，差异有统计学意义(P<005);(4)IMT值、左右侧颈动脉斑块厚度在E4组中高于E2.E3组，差异均有统计学意义(P均<0.05);E4组中颈动脉狭窄发生率高于E2、E3组，差异有统计学意义(P〈005),且E4表型组基因型存在时对应的颈动脉狭窄相关的ROC曲线提示曲线下面积为0.626(P<005)0结论：冠心病患者ApoE基因多态性与血脂、IMT、颈动脉斑块厚度及狭窄有相关性，E4表型组基因型存在时血脂JMT值、颈动脉斑块厚度水平相对较高旦增加颈动脉狭窄风险。［关键词］冠心病；ApoE基因多态性；血脂;动脉粥样硬化;颈动脉狭窄CorrelationbetweenApoEgenePolymorphismandBloodLipidandCarotidArteryDiseaseinPatientswithCoronaryHeartDiseaseTANGJun.ZHANGBin-qiang.XUXiarrlin,LIXiaoTei,CHENJun,MINXin-wen,ZHOUXin~tao,CHENJi~shun(DepartmentofCardiology,SinopharmDongfengGeneralHospital,HubeiUniversityofMedi-cine,Shiyan,Hubei442008,China)Abstract:0b；eciiveToinvestigatetherelationshipbetweenplasmalipids,carotidarterylesionsandApoEpolymorphisminpatientswithcoronaryheartdiseaseMethodsFromJanuary2019toAugust2020,280patientswithcoronaryarterydis-easeconfirmedbycoronaryangiographyanddiagnosedascarotidatheroscleroticplaquebycarotiduItrasoundinourhospitalwereselectedAIIpatientswereregularlytreatedwithstatinsforlipid~loweringtreatmentApoEgenepolymorphismwasde-tectedbyreaktimefluorescencequantitativePCRTheyweredividedintothreegroupsaccordingtoApoEgenotype,E2phenotypegroup:genotypeE2/2+E2/3;E3phenotypegroup:genotypeE3/3+E2/4;E4phenotypegroup:genotypeE3/4+E4/4Thegeneralclinicaldata,bloodlipid,carotidintima~mediathickness(IMT),carotidplaquethicknessandstenosisofthethreegroupswerecompared,andthecorrelationwithApoEgenepolymorphismwasanalyzedResus(1)Sixgenotypesweredetectedin280patients:E2/2(4cases),E2/3(39cases),E3/3(146cases),E2/4(19cases),E3/4(70cases),andE4/4(2cases)(2)Therewasnosignificantdifferenceinclinicaldataamongthe3groups(P>005)(3)ThelevelsofTC,triglycerideandLDL~CinE4groupweresignificantlyhigherthanthoseinE2andE3groups(P<005)(4)TheIMTandthethicknessofleftandrightcarotidplaqueinE4groupweresignificantlyhigherthanthoseinE2andE3［基金项目］国家自然科学基金项目(81872509);湖北省自然科学基金项目(2019CFC841);十堰市科技局引导性项目(19Y96);国药东风总医院卓越计划青年人才项目(2021Q04);湖北医药学院研窕生科技创新项目(YC2021043)［作者简介］唐俊(1995-),男，湖北十堰人，在读硕士研究生。E-mail:598759248@qqcom［通信作者］陈继舜(1974—)，男，湖北荆门人，教授，主任医师，硕士生导师，研究方向：冠心病的基础与临床。E-mail:376370276@qqcom groups(P<0.05).TheincidenceofcarotidarterystenosisinE4groupwassignificantlyhigherthanthatinE2andE3group(P<005).WhenthereweregenotypesinE4phenotypegroup,thecorrespondingROCcurveofcarotidarterysteno-sisindicatedthattheareaunderthecurvewas0626(P<005).ConcIusonApoEgenepolymorphismwascorrelatedwithbioodIipid,IMT,carotidplaquethicknessandstenosisinpatientswithcoronaryheartdisease.WhenthereweregenotypesinE4phenotypegroup,thelevelsofbloodlipid,IMTvalueandcarotidplaquethicknesswererelativelyhigh,whichin-creasedtheriskofcarotidstenosis Keywords:Coronaryheartdisease;ApoEgenepolymorphism;Lipids;Atherosclerosis;Carotidarterystenosis当前心脑血管疾病已成为世界上威胁人类健康的主要疾病，动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是其最基本的病理改变，而血脂异常作为AS的重要危险因素有着不可替代的临床应用价值。但临床上许多患者尽管使用他汀类药物将低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)降到正常范围甚至更低水平仍会发生急性心脑血管事件，这说明很有可能存在非传统危险因素参与其中。ApoE基因错义突变形成3个等位基因，称为ApoE2、ApoE3和ApoE4,组合产生6种基因型(E2/2,E3/3,E4/4,E2/3,E2/4,E3/4)［1_3］,这些分子结构的差异，通过影响脂蛋白的清除和脂质分布，最终对不同ApoE基因携带者的血脂水平产生不同的影响，并且与冠心病(coronaryheartdisease,CHD).脂蛋白肾小球病、阿尔茨海默病、缺血性脑卒中等多种疾病存在密切联系［4-5］。ApoE基因多态性与CHD的研究显示，ApoE基因型与血脂水平和冠状动脉及颈动脉风险之间存在线性关系，ApoE4参与AS,与颈内动脉厚度呈正相关［6~8］o当前研究数据证明颈动脉粥样硬化有很大的遗传性，颈动脉内中膜厚度(IMT)经常被用作AS的替代标志物，因为它与未来的血管事件(包括中风和心肌梗死)相关，传统的心血管危险因素无法解释IMT变异的显著比例，这表明遗传因素可能在该疾病的发展中发挥重要作用［6顶。因此,ApoE基因多态性可能与CHD及颈动脉粥样硬化斑块的发生发展有关。本研究目的是通过分析CHD患者ApoE基因多态性与血脂、IMT值、颈动脉斑块厚度及狭窄之间的可能关系，为临床诊断、预防心脑血管疾病提供新的基因导向。1资料与方法1.1研究对象与分组选取2019年1月至2020年8月就诊于国药东风总医院心内科40~75岁的住院患者共计280例为研究对象，且均在我院行冠状动脉造影及颈动脉超声检查明确诊断为CHD(冠状动脉主血管狭窄大于50%)合并颈动脉粥样硬化斑块形成者。所有患者均规律长期口服瑞舒伐他汀钙片10mg,1次/d,其中男性159例，女性121例。院中采集患者的基础资料及测定生化指标。将研究对象分为3组，E2表型组：基因型为E2/2+E2/3者；E3表型组：基因型为E3/3+E2/4者；E4表型组：基因型为E3/4+E4/4者。本研究经医院伦理委员会审批，患者及家属签署知情同意书。1.2排除标准排除糖尿病、心力衰竭、心脏瓣膜病、肺心病、癌症、血液病、严重肝肾功能障碍等患者。1.3仪器和试剂由武汉友芝友医疗科技股份有限公司生产的人类SLCO1B1和ApoE基因检测试剂盒(PCR-荧光探针法)、台式高速离心机、医用冰箱、定量实时荧光PCR仪、EDTA抗凝剂、颈动脉超声检查仪。1.4实验方法1.4.1血液生化检查采集入组患者清晨空腹外周静脉血5mL,3000r/min离心5min,保存上清液，并使用全自动生化仪检测TC、TG、HDL—C、LDL一C、血糖、肌酉干等生化指标水平。1.4.2ApoE基因多态性检测⑴采集同日清晨空腹外周静脉血5mL,置于含有EDTA抗凝管中密封4°C运输保存于当天行DNA提取。⑵样本DNA提取:依据天根血液基因组DNA提取试剂盒(TIANa-mpBloodDNAKitDP318)说明书提取。⑶紫外分光光度计测定DNA水平，要求DNA的A260/A280在1.8~2.0之间，DNA浓度为5~15ng///L。(4)取2以LDNA样本加入人类ApoE基因检测试剂反应液中上荧光定量PCR仪检测，PCR反应条件为：37°C,10min,1个循环;95°C,5min,1个循环;95°C,15s,60°C,45s,40个循环。⑸结果判读：以空白对照FAM.VIC通道无扩增曲线，或扩增曲线为直线或轻微斜线，无明显指数增长期，无Ct值或Ct值238,阳性对照的FAM、VIC通道Ct值M32,扩增曲线有明显指数增长期为判定结果有效；目的基因型别判读方式以Ct值＜38为阳性扩增，根据FAM、VIC通道的扩增情况参照人类SLCO1B1和ApoE基因检测试剂盒说明书判定样本基因型别。1.4.3颈动脉超声检查所有患者均由我院超声科具有副主任医师资历以上者采用彩色多普勒超声诊断仪完成检查。检查指标有IMT、最大斑块厚度、颈动脉有无狭窄。以双侧IMT平均值、左右侧最大斑块厚度作为该样本最终值纳入统计，而颈动脉狭窄形成者最终以例数纳入统计。1.5统计学分析采用SPSS23.0软件进行统计学分析，计量资料用均数土标准差（x±s）表示，计数资料用频数表示。3组间计量资料采用单因素方差分析法比较，组间两两比较采用LSD法检验，计数资料3组间和组间两两比较均采用北检验,P<005表示差异有统计学意义。2结果1ApoE基因型及等位基因频率分布280例研究对象中，检测出6种基因型:E2/2（4例）、E2/3（39例）、E3/3（146例）、E2/4（19例）、E3/4（70例）、E4/4（2例），分别占比为1.42%、1392%、52」4%、6,78%、2500%、071%;通过计算,ApoE等位基因E2、E3、E4例数分别为33.200.47;等位基因频率分别是12,18%,7380%J402%o见表1。可见，E3/3基因型及E3等位基因频率最常见，这与既往研究检测规律相符，且符合中国人ApoE基因频率E3>E4>E2的分布规律。2.2基础资料的比较通过E2、E3、E4表型组基础资料的比较可知，3组差异无统计学意义（P〉005）,见表2。2.3不同表型组血脂水平比较（1）TC.LDL-C和TG:E4组〉E3组〉E2组，差异均有统计学意义（P〈005）;（2）HDL-C:E2组〉E3组>E4组,但差异无统计学意义（P>005）o见表3。枷。E基因型及等位基因频率分布基因型。